Количественное определение флавоноидов спектрофотометрическим методом

В мерную колбу вместимостью 25 мл, предварительно взвешенную, переносят с помощью пипетки аликвоту анализируемого экстракта, равную 1 мл, и вновь взвешивают. В колбу с помощью пипетки добавляют 4 мл 5% раствора хлорида алюминия. Для приготовления раствора сравнения во вторую колбу вместимостью 25 мл с помощью пипетки переносят аликвоту (1 мл) анализируемого экстракта, после чего объем обеих колб доводят до метки 70% спиртом и оставляют на 30 мин. В случае помутнения растворов их фильтруют через бумажные фильтры в чистые стаканы. Оптическую плотность измеряют в интервале 408-616 нм на длине волны максимума поглощения в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм, в рабочую кювету помещают раствор с добавленным хлоридом алюминия, в кювету сравнения – раствор сравнения. Если максимум поглощения расположен в области 408-420 нм, в качестве стандарта используют ГСО рутина. Если максимум поглощения расположен в области 421-435 нм, в качестве стандарта используют ГСО кверцетина.

Результаты и обсуждение

В ходе работы проводилось исследование лекарственного растительного сырья на качественное и количественное содержание биофлавоноидов. Результаты качественного определения флавоноидов представлены в таблице 2.

Таблица 2. – качественные реакции на танин

По методике, предложенной Лазурьевским, основанной на образовании нерастворимых свинцовых солей полифенолов, мы определили содержание катехинов в исследуемых сортах зеленого чая и доказали, что выделенное вещество принадлежит к дубильным веществам катехинового ряда, при помощи цветных качественных реакции.

Для объективной оценки количественного определения флавоноидов были выбраны три образца лекарственного растительного сырья, представленных в таблице 3. [8]

Таблица 3. – Наименование лекарственного растительного сырья

Определение влажности

Для определения влажности проводили два параллельных определения на содержание влаги в растительном сырье. Для этого берут по две точные навески (около 5 г) каждой пробы. В сушильном шкафу при температуре 100-105⁰С навески были доведены до постоянной массы. После проведения испытаний и расчетов, получены следующие результаты, приведенные в таблице 4.

Таблица 4 – Содержание влаги в пробах лекарственного растительного сырья

На основании проведенных исследований можно сделать вывод о том, что во всех пробах содержание влаги для травы пустырника должно быть не более 13%, а для цветков календулы и плодов боярышника – не более 14%). [4] Количественное определение суммы флавоноидов в растительном сырье спектрофотометрическим методом при оптимальных условиях экстрагирования. В ходе исследования было выявлено, что наиболее полное извлечение определяемых веществ достигалось с использованием 70%-го спирта этилового, временем экстрагирования 2 ч и при температуре проведения эксперимента 60 °С. При определении количественного содержания флавоноидов лекарственного растительного сырья в пересчете на рутин, были получены данные, представленные в таблице 5 .

Таблица 5 – Содержание флавоноидов в пересчете на рутин в растительном сырье

Заключение

Полифенолы и их производные широко представлены в растительном мире. Многие из них являются природными антиоксидантами, которые в значительных количествах содержатся во многих пищевых растениях. Особенно много флавоноидов в винограде, зеленом чае и орехах. Попадая в наш организм с пищей, они проявляют свои ингибирующие свойства в радикальных биохимических процессах. Как известно, многие формы онкологических заболеваний инициируются активными свободными радикалами. Образуя устойчивые, а поэтому малореакционноспособные радикалы, многоатомные фенолы обрывают цепи в радикальных реакциях и тем самым тормозят развитие этих реакций, в том числе тех, которые сопровождают рост злокачественных опухолей. Исходя из выше сказанного, можно утверждать об актуальности данного исследования. Проанализировав материал по теме данного исследования, можно сделать следующие выводы: Полифенолы и их производные (танины, катехины) входят в состав чайного листа и обладают большой биологической ценностью:

а) способны поглощать и нейтрализовать свободные радикалы и останавливать цепные реакции;

б) проявляют антиоксидантные свойства;

в) обладают антимикробными свойствами;

г) обладают Р-витаминной активностью и т. д.

В чае содержится более 30 полифенолов, которые по традиции называют дубильными веществами или танинами. Они способны образовывать весьма устойчивые химические соединения с белками, что и приводит к «дубильному эффекту». Данный эффект имеет хорошее фармацевтическое применение — полифенолы чая действуют как кровоостанавливающие, ранозаживляющие, вяжущие, противовоспалительные и бактерицидные средства. Важнейшими структурными элементами молекул конденсированных танинов являются катехины — вещества (земельного характера, содержащиеся в чае, фруктах, ягодах. На основании полученных данных в ходе проведения эксперимента можно сделать следующие выводы: различные сорта зеленого чая содержат разное количество катехинов в своем составе. Из исследуемых сортов зеленого чая наибольшее количество катехинов содержится в чае «Greenfield» Flying Dragon (13,8 г.), наименьшее - «Принцесса Ява» традиционный (4,6). Следовательно, чай «Greenfield» Flying Dragon обладает полезными, целебными свойствами в большей степени, чем остальные сорта зеленого чая, а также оказывает наибольшее физиологическое воздействие на организм. Чем больше в чае танинов, тем более терпким (но не горьким!) и вяжущим вкусом он обладает. Обилие дубильных веществ придает заварке кровоостанавливающий и дезинфицирующий эффект. Известно, что катехины оказывают благотворное влияние на состояние сердечно-сосудистой системы. В состав лекарственного растительного сырья входит большое количество биологически активных компонентов, в том числе флавоноидов. Интерес к лекарственному растительному сырью, содержащему флавоноиды велик ввиду присущего им ши­рокого спектра биологического действия. В связи с этим современная наука занимается поиском оптимальных путей выделения, получения и использования флавоноидов. Основным фактором повышения интереса к лечебным свойствам лекарственных растений явилось то, что фитопрепараты обладают высокой безопасностью при достаточной эффективности, простотой приготовления и не исключают возможность длительного применения. Следует отметить, что для синтетических сильнодействующих препаратов характерны различные нежелательные и опасные побочные эффекты. В процессе работы проводились исследования методов количественного анализа лекарственного растительного сырья, а именно: травы пустырника, плодов боярышника и цветов календулы. Неотъемлемой частью в изучении количественного содержания флавоноидов в сырье является изучение способов извлечения флавоноидов из лекарственного растительного сырья

В ходе работы были использованы такие методы качественного определения, как спектрофотометрия . При сравнении данных методов было выявлено, что метод спектрофотометрии является самым дешевым, экспрессным методом. Данный метод широко используются для количественного определения содержания флавоноидов не только в условиях учебно-аналитической лаборатории, но и могут быть использованы в контрольно-аналитической лаборатории на предприятии в качестве экспрессных методов анализа.

Список литературы

1) Блинова К.Ф. Растения для нас: учеб. пособие / К.Ф. Блинова. - 1-е изд. - СПб.: Москва, 2001. - 189 с.

2) Фармакогнозия: учебник / М.М. Коноплёва и др.; под ред. М.М. Коноплёвой. - СПб.: Москва, 1999. - 236 с.

3) Биохемилюминесценция: учебник / А.И. Журавлёв и др.; под ред. А.И. Журавлёва. - СПб.: Москва, 1983. - 345с.

4) Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б. Ингибирование сывороточными антиоксидантами окисления люминола в присутствии гемоглобина и пероксида водорода / Вопросы медицинской химии. - 1997. - № 2. - С. 87-92.

5) Беляков В.А., Васильев Р.Ф., Федорова Г.Ф. Кинетика и катализ: учеб. пособие / В.А. Беляков и др. - 2-е изд. - СПб.: Москва, 1996. - 542 с.

6) Васильев Р.Ф., Вичутинский А.А., Черкасов А.С. Хемилгомипесценция, активированная производными антрацена / Р.Ф. Васильев и др. // Доклады АН СССР. - 1963. - № 1. - С. 124- 127.

7) Беляков В.А., Васильев Р.Ф., Федорова Г.Ф. О переносе энергии с химически возбуждаемых карбонильных соединений на производные антрацена и кислорода / В.А. Беляков и др. // Известия АН СССР. Сер. физическая. - 1973. - № 4. - С. 747-752.

8) Чуб В. Для чего нужны антоцианы / В. Чуб // Цветоводство. - 2008. - №6. - С. 22-25.

9) Машковский М. Д. Лекарственные средства. — 15-е изд. — М.: Новая Волна, 2005. — С. 629—630. — 1200 с.

10) Tang S, et al. Antioxidant activity of added tea catechins on lipid oxidation of raw minced red meat, poultry and fish muscle // Int. J Food Sci. Techn. 2001, V. 36. P. 685-692.

11) Tang SZ, et al. Antioxidative mechanisms of tea catechins in chicken meat systems // Food Chem. 2002, V. 76. P. 45-51.

12) Merzlyak M.N., Solovchenko A.E., Gitelson A.A. Reflectance spectral features and nondestructive estimation of chlorophyll. Carotenoid and anthocyanin с ontent in apple fruit // Postharv. Biol, and Technol. 2003, V. 27. P. 197-211.

13) Mozeti В., Treble P., Hribar J. Determination and Quantitation of Anthocyanins and

14) Hydroxycinnaraic Acids in Different Cultivars of Sweet Cherries (Prunus avium L.) from Nova Gorica Region (Slovenia), Food Technol // Biotechnol. 2002, V. 40. N. 3. P. 207212.

15) Harborne J.B., The chromatographic identification of anthocyanin pigments // J. Chromatogr. 1958, V. 1. N. 6. P. 473-488.

16) Middleton E., Jr., Kandaswami C., Theoharides T.C. The Effects of Plant Flavonoids on Mammalian Cells:Implications for Inflammation, Heart Disease, and Cancer. Pharmacol. Rev. 2000. V.52, No.4. P.673-751 -> abstract: [1] & Full Text.

17) Cowan M. M. Plant Products as Antimicrobial Agents. Clin. Microbiol. Rev. 1999. V.12, No.4. P.564-582..