Категории:

Дом Здоровье Зоология Информатика Искусство Искусство Компьютеры Кулинария Маркетинг Математика Медицина Менеджмент Образование Педагогика Питомцы Программирование Производство Промышленность Психология Разное Религия Социология Спорт Статистика Транспорт Физика Философия Финансы Химия Хобби Экология Экономика Электроника

Коэффициент наследуемости, корреляции, репрессии, методы вычисления и использование селекции.

Генетика и её значение

Генетика – наука о наследственности и изменчивости. В середине 19 Века возникла наука Генетика. Грегор Мендель открыл основу этой науки. Термин генетики ввел Бетсон в 1906 году. Генео- по лат (происхождение).
Значение генетики: Генетика-основа биологической науки. Развитие генетики не возможна без развитие наук. Современные методы исследование связи с математическим методом, химией, физике. Генетика является основой селекции. Генетика имеет значение в медицине, производство микробиологии, получение необходимых человеку веществ с помощью живых организмов, развивается генная инженерия – выделение из других и вводить в другие организмы.

2.Методы ген.исследований.
Происходят молекулярно, клеточном, тканевом, организменном и популяционных уровнях.
Гибридологический метод – самый первый метод. Гибридизация – скрещивание. Гибридология – это анализ результаты скрещивания. Основана Менделем, метод, является основой создания пародов животных и сортов растений. Можно определить, сколько генов влияют на признак и характер наследственного признака.
Генеалогический метод – родословная. Анализ родословной. Используется широко в медицине. Учитывая признаки, представленные разными поколений. Можно определить характер данного наследуемого признака. Особь для которого составляют родословную называют – пробанда.
Цитологический– цитология – клетка, роль организмов. Связано с изучением кариотипа (набора хромосом клетки). Строение хромосом и особенности их поведения при делении. Позволяет этот метод выявить изменения в числе хромосом и в структуру.
Биохимический или молекулярно-генетический метод связан, с изменением строения нуклеиновых кислот от ДНК и РНК их взаимосвязь со структурой и функцией белков.
Статический или математический, изучает количество признаков.
Популяционный – метод связан с математическим методом, изучает целые группы организмов – популяции, стадо или породы. Изучает распределение частот генов и генотипов.
Метод моделирования – изучает влияние отбора на структуру популяции и на особенности проявления признаков.

3. Понятие о наследственности и изменчивости.
Генетика изучает закономерности наследственности и изменчивости. Наследственность и изменчивость относятся к основным свойствам живой материи.
Изменчивость может быть ненаследственной и наследственной. Ненаследственная – проявляется в виде модификаций под влиянием условий окружающей среды (Модификационной).
Выделяют 4 типа наследственной изменчивости:
1) Комбинативная – проявляется при скрещивании в результате перекомбинации отцовских и материнских признаков
2) Коррелятивная – обусловлена взаимностью признаков (с увеличением живой массы коров – первотелок возрастает, но умен. жирность.
3) Онтогенетическая – каждый признак формируется самостоятельно, но в строгом соответствии с генетически детерминированным общим планом развития данной особи.
4) Мутационная- определяется наследственный материал в результате воздействия мутагенных факторов.

4. Модификационная изменчивость и методы ее изучения.
Модификационная изменчивость – возникает у организмов с одинаковым генотипами, находится в разных условиях среды и проявляются в виде модификации, т.е. отклонений в проявлении признака от среднего значения признака (большую или меньшую сторону) не наследует измененный характер для тех признаков гены, которых есть в генотипе. Признаки под влиянием условий среды может изменятся от min до max значения, поэтому кодификационная изменчивость характерна для количественных признаков, т.е. которые можно измерить. Качественные признаки под влиянием среды изменяется очень редко ( наследование окраски у кроликов – окрас зависит от температуры) Кривая нормальная или – Гауссовская кривая. При неблагоприятных условиях среды проявляется max значения признака. Особи с min и max значениями признака встречаются очень редко. Больше всего встречаются особи имеющие признаки близкие к среднему значению. Проявляемый признак в конкретных условиях среды называются нормой реакции генотипа.Норма реакции генотипа показывает размах изменчивости признака в конкретных условиях среды. Признаки нормы реакции:1)Широкая, 2)Узкая. Менее значимый для организма признака больше подвергается влиянию фактору среды. Чем более значимый для организма, тем в меньшей степени зависит от среды и имеет узкую норму реакции. Не наследуемая изменчивость относят фенокопии - по фенотипу имитирует наследственные изменения. Не наследуемые изменения относят морфозы – возникают в критические периоды эбриогенеза. Модификационные изменчивости бывают: 1.Географические(в зависимости от географического региона), 2.Региональная, 3.Экологическая изменчивость.
Особенности модификационной изменчивости:
1. Не наследуемость, 2. Имеет групповой характер(т.е. один проявляющийся признак у одних особей в одинаковых условиях)3. Имеет приспособительный характер, 4. Реализуется в пределах нормы реакции генотипа.

5. Вариационный ряд и его построение. Типы вариационных кривых.
Оценка селекционно-генетических параметров:

· Среднее арифметическое (величина именованная) – величина признака, как правило, чаще всего встречающаяся в выборке. Среднее значение признака.

· Составляют вариационный ряд, двойной ряд чисел.

1ый – значение всего признака, 2-ой ряд – число животных с проявлением такого признака

Этот ряд можно изобразить графически – кривая нормального распределения или Гауссовская прямая.

6. Среднее значение признака и его вычисление.
Всю информацию о распределении признака в выборке можно свести к 2 величинам: среднему значению и вариансе (дисперсии)

Среднее значение служит мерой "основной тенденции".

Среднее арифметическое или просто среднее значение вычисляется по формуле:

Где:

- среднее значение

- сумма индивидуальных значений признака у всех особей выборки

N - число особей

7. Определение степени изменчивости признака: лимиты, среднее квадратное отклонение, коэффициент вариаций, дисперсия (варианса)

Признаки всегда изменяются от минимума к максимуму, изучая среднее значение от признака к показателю (Лимиты - разница между минимум и максимальным значением, Сигма-показатель на сколько животные отличаются от среднего значения, коэффициент вариации - часть сигмы состоящая от среднего значения(%), Вариация - двойной ряд чисел:1- значения признака от минимума к максимума, 2 - число животных с признаком)
Для оценки селекционного параметра и оценки влияния различных факторов применяют дисперсионный анализ.
Факторы могут быть генетическими – порода, линия, генотип производителя
Факторы не генетические – температурный режим, факторы кормления, условия содержания, сезон.
В зависимости от числа учитываемого факторов дисперсионный анализ может быть:
1) Однофакторным
2) Многофакторным (учитывается более 1 фактора)
В основе дисперсионного анализа лежит расчет дисперсии.
Дисперсия - учитывается на основе отклонения, вариант от среднего значения по всей выборке или по градации факторов.
Существует 3 вида дисперсии:
-общая дисперсия, -фактор. дисперсия, -случайная дисперсия.
На основе общих дисперсий определяют средние вариации (

δ²изм=Су/N-1, δx=Lx/число градационного фактора, δс=Cz/N-число факторов градации

На основе этих показателей показывают определяют силу влияния факторов -
N²= Cx/Cу

В зависимости от значения этого показателя можно определить на сколько в % вносит свое влияние этот фактор.

8. Метод хи-квадрат для сравнения теоретического и фактического распределения.

Позволяет оценивать, насколько полученный в опыте результат соответствует теоретическому ожидаемому результату.

Z²= (0-E)²/E

Позволяет оценить отличие между опытными и теоретическими данными. Близки они или нет.

1) Z²_опыт.> Z²_табл., то полученный в опыте результат соответствует теоретически ожидаемому

2) Z²_опыт.< Z²_табл., то полученный результат не соответ. теоретич. ожидаемому. Это может быть:

1) Малого числа наблюдений

2) Неправильной постановки опыта( чем ниже значение Z², то гипотеза справедлива)

Мейоз и его фазы.

Мейоз – особый тип клеточного деления, которое происходит на опред.этапах жизненного цикла организма, размножающихся половым путём. Мейоз – сложное деление. Мейоз 1 – редукционное деление. Мейоз 2 – эквационное деление.
Фазы мейоза:
1) Редукционное. Профаза -1. Лептотена.- Стадия тонких нити, спирализация, хромосомы состоят из 2-ух хроматид, трудно различимы в микроскопе. Число хромосом – 2п.
2) Зиготена – Конъюгация ( по всей длине) т.е. образуется биваленты ( из 4-ех каждой) хромосомы ориентируются полимерами консолями и одному полюсу ( конъюгация за счет образование соматического комплекса) – 2п.
3) Пахитена – стадия толстых нитей гаплоидных числу бивалента. Происходит кроссинговер – обмен участками . – 2п
4) Диплотена – Стадия двойных нитей. спирализация хромосом, распадается симпатического комплекса, гомологические хромосомы отталкивают друг от друга. Образуется хиазм – Х-образные структуры, образуются хроматидами различных хромосом, образуется ядрушки. – 2п.
5) Диакене – Усиливается спирализация хромосом. Уменьшается число хиазм за счет дальнейшего отталкивания хромосом в бивалентах, биваленты располагаются по периферии ядра. Гомологические хромосомы удерживаются в состоянии бивалентов благодаря хиазмам. В конце исчезают ядрышки и разрушается ядерная мембрана. – 2п.
6) Метафаза-1. Биваленты распологаются экваториально плоскости клетки, образуя метафазную пластинку. Хромосомы спирализованы – утолщены и укорочены. Спирализация продолжается до Анафазы-1. Микротрубочки веретена деления прикрепляются к кинетохорам, образуя в профазу на центромере хромосом.-2п
7) Анафаза -1. Каждый состоит из 2-ух хроматид, прикрепляются к одной центромере, расходятся к противоположным полюсам. Расхождение осуществляется за счет сокращения микротрубочек веретена деления.-2п.
8) Телофаза-1. Характерно образуются ядерная мембрана, ядрышки и восстанавливается структура ядра.-1п
9) Интерфаза. Второе деление мейоза. Перед первым делением мейоза в интерфазу не происходит синтез ДНК и хромосомы не удерживаются.-1п.
10) Профаза-2. Хромосомы становятся хорошо различимы. В виде фигуры креста, сестринские хроматиды, отталкиваются друг от друга, удерживаются не поделившийся еще центромерой. В тех случаях, когда интерфаза короткая, профаза-2 выпадает.-1п.
11)Метафаза-2. Осуществляется по митотическому типу. Хромосомы располагаются по экваториальной плоскости, нити веретена деления прикрепляются к кинетехорам на центромерах хромосом. Морфологическое отличие хромосом от митатичсекого на этих стадиях более четко выражается двойная структура и большая степень спирализации. -1п.
12) Анафаза-2. Происходит удвоение центромер и в результате сокращение нитией ахроматинового веретена дочерние хроматиды (уже самостоятельные хромосомы) расходятся к разным полюсам клетки.-1п
13) Телофаза-2. Хромосомы деспирализуются образуя ядрышки, ядерную мембрану, клеточную перегородку.-1п
19. Кроссинговер и его значение для наследования свойств и признаков. Механизм кроссинговера.
Согласно теории Янссенса–Дарлингтона, кроссинговер происходит в профазе мейоза. Гомологичные хромосомы с гаплотипами хроматид АВ и ab образуют биваленты. В одной из хроматид в первой хромосоме происходит разрыв на участке А–В, тогда в прилежащей хроматиде второй хромосомы происходит разрыв на участке a–b. Клетка стремится исправить повреждение с помощью ферментов репарации–рекомбинации и присоединить фрагменты хроматид. Однако при этом возможно присоединение крест–накрест (кроссинговер), и образуются рекомбинантные гаплотипы (хроматиды) Ab и аВ. В анафазе первого деления мейоза происходит расхождение двухроматидных хромосом, а во втором делении – расхождение хроматид (однохроматидных хромосом). Хроматиды, которые не участвовали в кроссинговере, сохраняют исходные сочетания аллелей. Такие хроматиды (однохроматидные хромосомы) называютсянекроссоверными; с их участием разовьются некроссоверные гаметы, зиготы и особи. Рекомбинантные хроматиды, которые образовались в ходе кроссинговера, несут новые сочетания аллелей. Такие хроматиды (однохроматидные хромосомы) называются кроссоверными, с их участием разовьются кроссоверные гаметы, зиготы и особи. Таким образом, вследствие кроссинговера происходит рекомбинация – появление новых сочетаний (гаплотипов) наследственных задатков в хромосомах.
Гены распологаемые в хромосоме линейно и чем чаще происходит кроссинговер, тем дальше гены стоят друг от друга.
Кроссинговер может быть:
1.Одинарным - в 1 месте, 2. Двойным, 3. Множественным.
Для того чтобы произошел кроссинговер необходимо:1)перекрестки, 2) разрыв, 3)обмен.
Факторы влияющие на кроссинговер:
1) Пол организма ( у Самцов – дрозофилы, у самок – шелкопряды, НЕТ КРОССИНГОВЕРА)
2) Возраст ( Чем старше особь тем меньше кроссинговер)
3)Температура ( При повышенной t, чаще просиходит кроссинговер, чем при пониженной.)
Вероятность кроссинговера отражает расстояние между генами и чем ближе гены друг к другу, тем кроссинговера вероятность меньше. Они состоят из генетической карты хромосом – это схема относится расположение генов хромосом. Кроссинговер если произошел в 1 участке, препятствует прохождению кроссинговера близких участков – такое называют интерференция.
20. Образование половых клеток у животных (сперматогенез и овогенез). Оплодотворение и его и его генетическая сущность

Сперматогенез. Начинается с момента закладки половых желез из специализированных соматических клеток – гоний. В сперматогенезе клетки происходят 4 стадии: размножение, рост, созревание, формирование. Первый период сперматогенеза – период размножения первичных половых клеток, дающих начало сперматогониям – мелким округлым клеткам, с очень незначительным количеством цитоплазмы в виде тонкой каемки вокруг ядра, энергично размножающихся митозом.
Второй период сперматогенеза – период роста – характеризуется прекращением размножения сперматогониев и превращением их в сперматоциты 1 порядка. Сперматоциты растут, увеличиваясь в размерах в 4 и более раз.
Третий период сперматогенеза носит название периода созревания. Созревание заключается в двух быстро следующих друг за другом делениях сперматоцитов I порядка в результате чего сначала получаются два сперматоцита II порядка, а затем четыре сперматиды.
Это деление представляет собой митоз и образующиеся сперматиды оказываются носителями гаплоидного набора хромосом.
Четвертый период – период формирования спермиев. В течение этого периода сперматиды приобретают специальные приспособления, необходимые для обеспечения процесса оплодотворения и превращаются в сперматозоиды.
Овогенез. Овогенез- это процесс образования и развития женских половых клеток. Он включает в себя 3 фазы:1) размножение; 2) рост; 3) созревание.
Фаза размножения начинается в эмбриональном периоде и продолжается в течение 1-го года жизни. К моменту рождения имеется около 2-х млн клеток. К периоду полового созревания остается около 40 тыс. половых клеток и в последующем 1 раз в 28-32 дня происходит созревание и выход одной яйцеклетки в маточную трубу - овуляция. Овуляция прекращается при наступлении беременности или менопаузы. Сущностью фазы размножения является митотическое деление овогоний.
Фаза роста, размножение овогоний останавливается и клетки яичника вступают в фазу малого роста, превращаясь в овоциты 1-го порядка. Наступает половое созревания, то есть появлением женских половых гормонов. Далее овоциты 1-го порядка вступают в фазу большого роста.
Фаза созревания включает в себя два деления. При первом делении созревания овоцит 1-го порядка делится, в результате чего образуются овоцит 2-го порядка и небольшое редукционное тельце. Овоцит 2-го порядка получает почти всю массу накопленного желтка и поэтому остается столь же крупным по объему, как и овоцит 1-го порядка. Редукционное же тельце представляет собой мелкую клетку с небольшим количеством цитоплазмы. При втором делении созревания в результате деления овоцита 2-го порядка образуются одна яйцеклетка и второе редукционное тельце. Первое редукционное тельце иногда тоже делится на две одинаковые мелкие клетки. В результате этих преобразований овоцита 1-го порядка образуются одна яйцеклетка и три редукционных тельца.
Яйцеклетки - это наиболее крупные клетки в организме человека, их размер составляет около 130-160 мкм. В цитоплазме яйцеклетки содержатся все органеллы (за исключением клеточного центра) и включения, основной из них - желток (лецитин). В яйцеклетке различают вегетативный полюс, в котором накапливается желток, и анимальный полюс куда смещается ядро.

21. Нерегулярные типы полового размножения.

Партеногенез – развитие организма из неоплодотворённого яйца (без слияния её со сперматозоидом )
В настоящее время различают естественный и искусственный партеногенез: Естественный партеногенез-черви , насекомые ( муравьи , пчёлы , термиты , тли), низшие ракообразные ( дафнии )
Факультативный партеногенез – любое яйцо способно развиваться как без оплодотворения , так и после него ( встречается у пчёл , муравьёв , коловраток , у которых из оплодотворённых яиц развиваются самки , а из неоплодотворённых – самцы ) ; является приспособлением к регуляции численного соотношения полов в популяции.
Факультативный партеногенез бывает женским и мужским : Женский партеногенез часто встречается у пчёл , муравьёв , коловраток , у которых самцы развиваются только из неоплодотворённых яиц, мужской партеногенез – наблюдается у некоторых изогамных водорослей.
Облигатный , т. е. обязательный партеногенез – все яйцеклетки развиваются только без оплодотворения ( наблюдается для кавказской ящерицы , у которой известны только самки )
Циклический партеногенез - у многих видов партеногенез носит циклический характер ( дафнии , коловратки тли ) – в летнее время существуют лишь самки , размножающиеся партеногенетически а осенью партеногенез сменяется размножением с оплодотворением ( зигогенез ) с помощью появляющихся самцов ( это явление получило название гетерогении – чередование партеногенеза с зигогенезом )Установлено существование партеногенеза у птиц ( у одной из пород индеек многие яйца развиваются партеногенетически ; из них появляются только самцы
Андрогенез - Является одной из форм партеногенеза – если в яйцеклетку с инактивированным или редуцированным ядром проникают несколько сперматозоидов, то из такой яйцеклетки в результате слияния мужских (сперматозоидных) ядер разовьётся мужской организм без участия материнского набора хромосом ( например , у тутового шелкопряда )
Гиногенез ( псевдогамия ) - Сперматозоид проникает в яйцеклетку и активирует её ( стимулиреют начало дробления ) , но не оплодотворяет её , а погибает ; развитие яйцеклетки происходит без участия ядра сперматозоида , а появляющееся потомство состоит только из женских особей ( свойственен для некоторых рыб , круглых червей – нематод ). Так , например , у серебристого карася самцы отсутствуют , а самки мечут икру в тех же местах , где и другие карповые рыбы ; сперматозоиды других видов рыб активируют яйцеклетки карася Гиногенез можно вызвать искусственно у тутового шелкопряда , рыб и амфибий

Апомиксис -Является нерегулярным типом полового размножения у растений Под апомиксисом понимают либо развитие из неоплодотворённой яйцеклетки , либо возникновение зародыша вообще не из гамет( например , у цветковых , из различных клеток зародышевого мешка )

22.Генетический (гибридологический) анализ и его использование в генетике.
Гибридологический метод самый первый метод. Гибридизация -скрещивание. Гибридология– это анализ результатов скрещивания. Этот метод заключается в гибридизации и последующем учёте расщепления в поколениях, был разработан и применен Г. Менделем в 1859-1863гг. для изучения наследования признаков у гороха. Метод является основой создания пород животных и сортов растений. Можно определить, сколько генов влияют на признак и характер наследственного признака. Сформулировал непреложные правила, которым следуют все генетики: 1)скрещиваемые организмы должны принадлежать к одному виду. 2) скрещиваемые организмы должны четко различаться по отдельным признакам. 3)изучаемые признаки должны быть константы т.е воспроиз.из покол.в покол. 4)необходимы характеристика и количественный учет всех классов потомков.

25.Понятие о генотипе и фенотипе, гомозиготности и гетерозиготности. Альтернативные аллельные гены и признаки.
Фенотип– это совокупность всех признаков и свойства организма, т.е. внешние проявления. Признаки можно разделить: 1) Морфологические – строение связано со строением органов, тканей. 2) Физиологическое – изучение функция органов тканей, обуславливает приспособленность, жизнеспособность, плодовитость. 3) Биохимическое – изучение обмена веществ, все эти этапы контролируют определения генами, альбинизм.
Генотип – это совокупность всех генов организма. , присущих данному организму, т.е. его генетическая конституция.
Гомозигота – это особь имеющая одинаковые аллели одного и того же гена. АА, аа.
Гетерозигота – это особь имеющая разные аллели одного гена Аа, Вв.
Впервые введён английским генетиком У. Бэтсоном в 1902.
Аллель – состав генов. Аллельные гены- это гены, расположенные в одинаковых локусах(место нахождения гена в хромосоме) гомологичных хромосом,
контролируют один и тот же признак, но разное его проявление.
Альтернативные признаки - признаки, которые не могут быть в организме одновременно.
Доминантный признак- подавляющий, наступающий (А). Рецессивный признак - подавляемый , отступающий(а)

26. Доминантные и рецессивные признаки. Закон единообразия признаков гибридов F1.

Доминирование – преобладание одной аллели над другой у гетерозигот (Аа). Рецессивный ген – подавляемый, не проявляющийся в гетерозиготном состоянии.
1-й закон Менделя – закон единообразия гибридов первого поколения.
Р ♀ АА (жел) × ♂ аа (зел)
Г А а
F1 Аа (жел)

При скрещивании гомозигот все гибриды первого поколения единообразны по генотипу и фенотипу.

27.Закон расщепления признаков у гибридов F2 при моногибридном скрещивании.

Моногибридное скрещивание – это когда родительские особи различны по одной паре признаков ( желтый, зеленый или высокий, низкий)
Второй закон Менделя – закон расщепления гибридов во втором поколении. Отношение числа потомков второго поколения с доминантным признаком к числу потомков с рецессивным признаком оказалось равным 3:1. По фен.3:1, по генотипу 1:2:1
Р ♀Аа × ♂Аа
г А а А а
F2 АА Аа Аа аа

Гипотеза доминирования

Гипотеза доминирования основана на том, что большинство рецессивных генов отрицательно влияет на организм, поэтому накопление у гетерозиготных особей большего числа доминантных генов положительно влияет на жизнеспособность и продуктивность. Авторы ее дополнили эти представления положением о том, что благодаря ди- и пол и гибридному скрещиванию у гибридов накапливается больше доминантных генов, чем их было у родителей, а значит подавляется большее число рецессивных генов, следствием чего и является гетерозис.

Однако гипотеза доминирования не в силах объяснить разницу при реципрокных скрещиваниях и скрещиваниях аутбредных популяций, а также причину невозможность закрепления гетерозиса в ряду поколений.

Согласно гипотезе доминирования, предполагаются такие типы взаимодействия генов: доминирование, аддитивное взаимодействие доминантных генов и эпистаз.

Типология групп крови

Количество изученных и охарактеризованных групповых систем крови постоянно растет. Международное общество переливания крови в настоящее время признаёт 29 основных систем групп крови. В число которых входят и две важнейшие классификации группы крови человека — это система ABО и резус-система.

Система ABO.

В плазме крови человека могут содержаться агглютинины α и β, в эритроцитах — агглютиногены A и B, причём из белков A и α содержится один и только один, то же самое — для белков B и β. Таким образом, существует четыре допустимых комбинации; то, какая из них характерна для данного человека, определяет его группу крови:

* α и β: первая (O)

* A и β: вторая (A)

* α и B: третья (B)

* A и B: четвёртая (AB)

Система Rh (резус-система)

Резус-фактор — это антиген (белок), который находится на поверхности красных кровяных телец (эритроцитов). Он обнаружен в 1919 г в крови обезьян, а позже — и у людей. Около 85 % европейцев (99 % индейцев и азиатов) имеют резус-фактор и соответственно являются резус-положительными. Остальные же 15 % (7 % у африканцев), у которых его нет, — резус-отрицательный. Резус-фактор играет важную роль в формировании так называемой гемолитической желтухи новорожденных, вызываемой вследствие резус-конфликта кровяных телец иммунизованной матери и плода.

Причины резус-конфликта

Попадание резус-белка в кровь резус-отрицательной женщины возможно по причинам, связанным с беременностью и не связанным с нею. Так, нарушение плацентарного барьера, приводящее к забросу эритроцитов плода в кровь матери, может быть при:

· прошлых родах

· прерываниях беременности

· внематочной беременности

· осложнениях беременности с кровотечениями (отслойкой плодного яйца или плаценты)

· проведении пункции плодного пузыря (амниоцентез) или пуповины (кордоцентез)

Кроме беременности, контакт с резус-белком может произойти при переливании резус-положительной крови или, например, использовании одной иглы при совместном употреблении наркотиков.