В случае попадания инфицированного материала или реактивов на руки, халат, стол, необходимо сообщить о случившемся преподавателю.

5. При работе со спиртовками КАТЕГОРИЧЕСКИ ЗАПРЕЩАЕТСЯ перемещать горящие спиртовки или зажигать одну от другой.

6. По окончании работы студент обязан, навести порядок на своем рабочем месте: вылить содержимое лотка в специальное ведро, вымыть лоток от красителей, сдать на стол преподавателя обработанный материал, демонстрационные препараты, протереть от иммерсионного масла объектив микроскопа.

7. Нельзя оставлять препарат на предметном столике микроскопа.

8. После окончания работы необходимо выключить свет на столе и тщательно вымыть руки с мылом.

С правилами техники безопасности ознакомлен(а) -

«_____» ____________________________20__г. __________________________________

(подпись студента)

ОТМЕТКА О СДАЧЕ УЧЕБНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЫ

Занятие № 1

ТЕМА: Режим работы в бактериологической лаборатории. Методы микроскопии. Иммерсионная система микроскопа. Морфология бактерий.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Ознакомить с режимом работы в баклаборатории и иммерсионной системой микроскопа.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Отличие эукариотов от прокариотов.

2. Кто открыл впервые микроорганизмы?

3. Заслуги Л. Пастера, Р. Коха, И.И. Мечникова в развитии микробиологии.

4. Назовите типы современных микроскопов.

5. Правила работы в микробиологической лаборатории?

6. Какие микроскопы применяют для изучения микробов ипринцип их устройства?

7. Какова систематика микробов?

8. Как пользоваться иммерсионной системой микроскопа?

9. От чего зависит разрешающая способность микроскопа?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Ознакомиться с оборудованием, режимом и с правилами работы в бактериологической лаборатории.

2. Ознакомиться с иммерсионной системой микроскопа.

3. Промикроскопировать готовые препараты из чистых культурстафилококка, стрептококка, гонококка, кишечной палочки, зарисовать в тетради основные формы бактерий.

4. Оформление протокола исследования.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Техника микроскопирования

В связи с очень малыми размерами бактерий изучение их морфологии возможно только при большом увеличении, достигаемом при помощи иммерсионного масла, которое позволяет создать единую систему между предметным стеклом и особым, х90-кратным (с черной полоской) объективом.

При микроскопировании окрашенных объектов необходимо создать яркое освещение с помощью вогнутого зеркала, поднятого конденсора и полностью открытой диафрагмы.

Каплю иммерсионного масла наносят на готовый препарат на стекле. Затем стекло переносят на столик микроскопа. Иммерсионный объектив погружают в масло осторожно, под контролем глаза до явного контакта объектива с маслом. Затем объектив поднимают, не выводя из капли масла и глядя в окуляр для нахождения объекта исследования («поля зрения»). Четкое изображение препарата достигается регулировкой сначала макровинтом (для обнаружения объекта), а затем микровинтом для регулировки резкости изображения.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования – мазки-препараты

Цель – изучение иммерсионной микроскопии, знакомство с морфологией бактерий.

Заключение: Освоена техника иммерсионной микроскопии. Изучены шаровидные и палочковидные формы бактерий.

Занятие № 2

ТЕМА: Морфология бактерий. Техника приготовления препарата-мазка. Простые методы окраски.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить морфологию бактерий. Приготовить мазок-препарат из культур бактерий и окрасить его простым методом.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Какие формы имеют бактерии?

2. Назвать шаровидные формы бактерий. Привести примеры.

3. Назвать палочковидные, извитые формы бактерий. Привести примеры.

4. Какие красители применяют в микробиологической практике?

5. Как приготовить препарат из бульонной и агаровой культур?

6. Этапы приготовления бактериального препарата.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Из бульонной культуры стафилококка и стрептококка приготовить мазок, высушить, зафиксировать. Окрасить простым методом. Промикроскопировать, зарисовать.

2. Из агаровой культуры кишечной палочки приготовить мазок.
Высушить, зафиксировать, окрасить простым методом. Промикроскопировать, зарисовать.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Техника приготовления бактериального препарата

Мазки готовят на обезжиренных предметных стеклах, предварительно обрисовав карандашом место будущего мазка с противоположной стороны предметного стекла. При приготовлении мазка из жидкой питательной среды, материал берут стерильной бактериальной петлей, наносят на стекло и растирают над очерченной площадкой. В случае приготовления мазка из плотной питательной среды, на предметное стекло предварительно наносят каплю воды, и материал растирают, постепенно готовя однородную взвесь.

Бактериальную петлю перед использованием и с оставшейся культурой стерилизуют в пламени горелки. Приготовленный мазок высушивают на воздухе или держа высоко над пламенем спиртовки.

После этого препарат фиксируют, для чего мазок стороной, где нет материала, троекратно проводят через середину пламени горелки.

Фиксация позволяет убить микробы, прикрепить их к стеклу и, наконец, убитые микробы окрашиваются лучше, чем живые.

1. Техника простого метода окраски

Окраска бактерий преследует цель сделать их резко отличными от фона, что позволяет изучить под микроскопом их морфологию и структуру. В микробиологии используют простые и сложные методы окраски препаратов.

При ПРОСТОМ МЕТОДЕ окраски, мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например, водным фуксином (1-2 мин.) или метиленовой синью (3-5 мин.), промывают водой, высушивают и микроскопируют.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования – чистая культура микроорганизмов

Цель – изучение техники приготовления мазка и окраски простым методом

Заключение: Освоена техника приготовления мазка, изучен простой метод окраски.

Занятие №3

ТЕМА: Структура бактериальной клетки: ядро, цитоплазма, клеточная оболочка. Сложные методы окраски. Окраска по Граму.Особенности кислотоустойчивых бактерий и их окраска по методу Циля- Нильсену.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Освоить сложные методы окраски по Граму и Цилю-Нильсену.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Назовите основные структуры бактериальной клетки.

2. Каково строение и функции клеточной стенки и цитоплазматической мембраны?

3. Химический состав, организация и функция бактериального ядра.

4. Принципиальное отличия простых способов окраски от сложных.

5. Перечислите этапы окраски по Граму, приведите примеры грамположительных и грамотрицательных бактерий. Механизм окраски по Граму.

6. Перечислите этапы окраски по Цилю-Нильсену. Практическое применение этого метода окраски.

7. Назовите кислотоустойчивые микроорганизмы и чем обусловлены их свойства?

8. Для каких бактерий и почему применяется метод окраски по Цилю-Нильсену?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Освоение сложных методов окраски:

а) Приготовить смешанный мазок из чистых культур стафилококка и кишечной палочки. Окраска по Граму.

б) Приготовить мазок из мокроты (БЦЖ). Окраска по Цилю–Нильсену.

в) Промикроскопировать с иммерсионной системой микроскопа.

1. Оформление протокола исследования.

2. Внести в латино-русский словарь все названия микробов к данному занятию.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ окраски включают последовательное нанесение на препарат красителей, различающихся по химическому составу и цвету, протрав и дифференцирующих веществ. Это позволяет предварительно дифференцировать микробы и выявить определенные структуры клеток.

Метод окраски по Граму

Окраска по Граму является важным диагностическим признаком идентификации бактерий. В результате окраски по Граму все бактерии делятся на две группы: грамположительные (фиолетового) и грамотрицательные (красного цвета).

Техника окраски по Граму

1. Фиксированный мазок кладут на бактериологический мостик и покрывают полоской фильтровальной бумаги, пропитанной раствором генцианвиолета; на бумажную полоску наносят воду. Через 2 минуты полоску удаляют.
2. Не промывая препарат водой, наносят раствор Люголя на 1 минуту. Затем раствор Люголя сливают .
3. Препарат обесцвечивают спиртом 20-30 секунд (до отхождения фиолетовых струек краски).
4. Препарат промывают водой.
5. Окрашивают водным фуксином 2 минуты.
6. Препарат промывают водой.
7. Высушивают фильтровальной бумагой.

Метод окраски по Цилю-Нильсену

Для обнаружения некоторых микробов, богатых липидами (например, возбудителей туберкулеза, лепры и др.), применяют метод окраски по Цилю-Нильсену.

Обесцвечивание кислотой приводит к потере красителя кислотоподатливыми микробами, и они окрашиваются в синий цвет. Кислотоустойчивые микробы остаются красными.

Техника окраски по Цилю-Нильсену

1. Для окрашивания используют концентрированный раствор карболового фуксина Циля. С целью улучшения проникновения красителя в клетку препарат с наложенной на него полоской фильтровальной бумаги и красителем подогревают над пламенем горелки троекратно до появления пара.

2. Затем препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, предварительно удалив фильтровальную бумагу.

3. Промывают водой.

4. Докрашивают метиленовой синей в течение 3-5 минут

5. Препарат промывают водой.

6. Высушивают фильтровальной бумагой.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования – 1) смесь бактерий 2) мокрота

Цель – изучение сложных методов окраски по Граму и Цилю-Нильсену

Заключение: Изучены сложные методы окраски по …….

Занятие № 4

ТЕМА: Структура бактериальной клетки, споры, капсула, жгутики. Методы их обнаружения.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить структуру бактериальной клетки. Освоение сложных методов окраски микробов по Ожешко, Бурри-Гинсу. Определение подвижности бактерий методом «висячей» и «раздавленной» капли.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Какова структура бактериальной клетки?

2. Дайте характеристику спор бактерий (их форма, расположение, ультраструктура, значение).

3. Перечислите стадии спорообразования. Как происходит прорастание спор в вегетативные клетки?

4. Назовите этапы окраски спор по методу Ожешко.

5. При какой температуре погибают споры и где надо стерилизовать споросодержащий материал.

6. Назовите условия, способствующие образованию капсул, особенности химического состава и значение капсулы для патогенных микробов.

7. Назовите микробы:

а) образующие капсулу только в организме человека;

б) образующие капсулу в организме животного или человека и вне его.

8.Перечислите методы выявления капсул.

9.Каково строение, химический состав и функции жгутиков.

10. Перечислите методы обнаружения жгутиков и подвижности у бактерий.

11. Назовите группы микробов в зависимости от расположения
жгутиков.

12. Назовите «обязательные» и «необязательные» структуры бактерий.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Освоение сложных методов окраски:

а) Приготовить мазок из взвеси спорообразующих бактерий (почвенная болтушка). Окраска по Ожешко.

б)Из зубного налета приготовить препарат по Бурри, окрасить по Гинсу. Микроскопировать. Зарисовать.

в) Промикроскопировать с иммерсионной системой микроскопа.

2. Из взвеси культуры E.coli в физиологическом растворе приготовить препарат «висячую» каплю. Микроскопировать.

3. Зарисовать в тетрадь расположение и количество жгутиков у различных микроорганизмов.

4. Оформление протокола исследования.

5. Внести в латино-русский словарь все названия микробов к данному занятию.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Метод окраски по Ожешко

1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор соляной кислоты и подогревают на пламени горелки в течение 2 минут, до появления паров.

2. Препарат промывают водой, высушивают и фиксируют.

3. Докрашивают по методу Циля-Нильсена.

Споры бактерий после данной окраски приобретают красный цвет, а тело бактерий – синий.

1. Метод окраски по Бурри-Гинсу

1. Готовят препарат по Бурри: смешивают каплю взвеси микробов с каплей туши и при помощи стекла со шлифовальным краем готовят мазок также, как мазки из крови;

2. Затем его высушивают и фиксируют.

3. На мазок наносят водный раствор фуксина (в разведении 1:3)на 1-2 минуты.

4. Промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют.

Бактерии окрашиваются в красный цвет, а капсулы остаются неокрашенными.

2. Метод «висячая капля»

Каплю исследуемого материала наносят на середину обезжиренного покровного стекла. Затем покровное стекло быстро поворачивают каплей вниз и накладывают на предметное стекло с углублением («лункой») в середине. Капля должна свободно свисать в углубление, не соприкасаясь с его дном и краями. Края выемки на предметном стекле следует предварительно смазать вазелином. Таким образом, капля оказывается герметически закрытой во влажной камере и защищенной от высыхания.

3. Метод «раздавленная капля»

На середину предметного стекла наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала. Эту каплю накрывают покровным стеклом, осторожно накладывая его пинцетом, чтобы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха. Удачно сделанная капля заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, но при этом жидкость не выступает за края покровного стекла.

В микробиологической практике методы «висячей» и «раздавленной» капли используются для определения подвижности бактерий.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования – 1) культура спорообразующих бактерий 2)зубной налет 3)суточная культура E. Coli/

Цель – изучение сложных методов окраски по Ожешко, Бурри-Гинсу и определение подвижности бактерий методами «висячей капли» и «раздавленной капли»

Заключение: Изучены сложный метод окраски по …….

Для выявления капсулы бактерий, а также методы……………………………………для определения подвижности бактерий.

Занятие №5

ТЕМА: Действие физических и химических факторов на микроорганизмы. Методы стерилизации. Дезинфекция. Питательные среды. Культивирование бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (1 день исследования).

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить различные методы стерилизации и дезинфекции.Ознакомиться с различными питательными средами, способами приготовления основных питательных сред, методами и техникой культивирования бактерий.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Дайте определение понятиям «стерилизация», «дезинфекция».

2. Перечислите методы стерилизации под действием высокой температуры. В каких случаях используют тот или иной метод.

3.Что такое пастеризация, тиндализация? Какие материалы стерилизуют этими методами?

4.Что такое «контроль стерилизации»?

5. Какие вещества относятся к детергентам? Механизм их антибактериального действия.

6. Перечислите основные дезинфицирующие средства.

7. Как стерилизовать стеклянную посуду?

8. Как проводят стерилизацию простых питательных сред? Как стерилизуют

сахаросодержащие питательные среды?

9. Принципы классификации питательных сред и их применение в микробиологической практике.

10. Какие среды называются элективными? Приведите примеры.

11. Какие известны дифференциально-диагностические среды? Их целевое назначение.

12. Способы и типы питания бактерий.

13. Что такое культура бактерий? Чистая культура бактерий? Почему надо работать с чистой культурой?

14. Способы посева на жидкие и плотные питательные среды.

15. Какой аппарат используют для культивирования бактерий? Оптимальная температура культивирования бактерий.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Ознакомиться с аппаратурой для стерилизации (автоклав, печь Пастера, бактериальные фильтры)
2. Приготовить лабораторную посуду (чашки, пробирки, пипетки) для стерилизации в сухожаровом шкафу.
3. Постановка опыта для изучения дезинфицирующего действия 5% карболовой кислоты на споровые и вегетативные формы микроорганизмов (B. anthracoides и E.coli).

4. Ознакомление с протоколом исследования.

5. Ознакомление с различными питательными средами, способами их приготовления. Демонстрация готовых питательных сред (СПБ, СПА, желчный бульон, сахарный агар, щелочной агар, молочно-солевой агар, кровяной агар).

6. Характеристика методов стерилизации (шаблон домашнего задания).

7. Демонстрация мазка, приготовленного из исследуемого материала. Окраска по Граму. Результаты микроскопирования зарисовать.

8. 1-й этап бактериологического метода исследования.Методика посева исследуемого материала на чашку с СПА с помощью бактериальной петли.

9. Оформление протокола исследования.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Стерилизация – один из важнейших участков работы микробиологической лаборатории, представляет собой полное обеспложивание (обеззараживание) объекта. В микробиологической лаборатории стерилизации подлежат питательные среды, используемые растворы, посуда, инструменты и иной рабочий, а также отработанный заразный материал.

Различают физические, механические и химические и биологические методы стерилизации.

Физические методы основаны на различных способах нагревания (прокаливании в пламени газовой горелки, сухим «жаром» в печи Пастера, текучим паром и паром под давлением в автоклаве), а также на разных видах радиационного воздействия (УФ- и γ-облучение).

К механическим методам относится фильтрование (бактериальные фильтры), к химическим – использование дезинфицирующих средств (растворов перекиси водорода, глутарового альдегида и газов – окиси этилена, паров нормальдегида в этиловом спирте), а биологический метод стерилизации основан на применении антибиотиков и бактериофагов.

Качество стерилизации в соответствии с нормативными документами постоянно контролируется, для чего используют температурные индикаторы (вещества с известной температурой плавления, изменения окраски) и (или) проводят бактериологическое (вирусологическое) исследование материала, прошедшего стерилизацию. Работа стерилизационных установок и контроль за качеством стерилизации подлежат строгому учету.

МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Из исследуемого материала приготовить мазок, окрасить по Граму. Результаты ориентировочной микроскопии зарисовать в протоколе и на основании микроскопической картины сделать предварительный вывод о наличии микробов в исследуемом материале.

1. Бактериальной петлей провести посев исследуемого материала на плотную питательную среду (чашку с СПА) следующим способом:

Взять пробирку с исследуемым материалом в левую руку. В правой руке находится стерильная петля, которую следует держать как писчее перо. Правым мизинцем прижать пробку к мякоти ладони, вынуть ее из пробирки и держать в руке. Ввести петлю в пробирку, охладить ее о внутреннюю стенку пробирки, взять исследуемый материал петлей и, не дотрагиваясь до стенок пробирки, вынуть бактериальную петлю. Пробирку и край ее провести через огонь, закрыть пробирку и поставить в штатив. Провести посев материала на питательную среду.

При посеве необходимо строго соблюдать определенные правила.

Посев производить только вблизи пламени горелки. Чашку с агаром раскрыть только тогда, когда материал находится на петле!Чашка с питательной средой должна лежать на столе крышкой кверху. Кончиками пальцев левой руки нужно взяться за крышку чашки и легким движением опрокинуть чашку, прижав ее указательным и средним пальцами к ладонной мякоти большого пальца. Крышка кладется на стол, а открытая чашка остается в руке. Открытую чашку можно держать вертикально или слегка наклонно. Во время посева нельзя разговаривать. Петлю с материалом осторожно приложить к поверхности агара вблизи от края чашки, удаляя тем самым излишки взятого материала. Затем петлю приложить к другому участку агара и распределить материал петлей параллельными штрихами на расстоянии 0,5 см в двух взаимоперпендикулярных направлениях в виде сетки.

Посев петлей проводить осторожно, чтобы не повредить поверхность среды. Для этого петля должна быть всегда параллельна плоскости агара. Это достигается наклоном чашки, находящейся в левой руке. По окончании посева чашку кладут в открытую крышку, петлю прокаливают и ставят в штатив. Надписи делают только на дне чашке и посевы помещают в термостат (37ºС) на необходимое для роста бактерий время (чаще всего – на 20-24 часа).

Для культивирования бактерий используют питательные среды. К ним предъявляется ряд требований:

• питательность – среды должны содержать все необходимые для питания бактерий вещества;
• изотоничность – они должны содержать набор солей для поддержания осмотического давления;
• оптимальный рН (для большинства бактерий 7,2 – 7,6);
• прозрачность, чтобы был виден рост бактерий;
• стерильность, чтобы не было других бактерий.

По консистенции питательные среды делятся на: жидкие, плотные и полужидкие.

По составу питательные среды делят на:

• простые: 1% пептонная вода, сухой питательный бульон (СПБ), сухой питательный агар (СПА);
• сложные: сахарный бульон, сывороточный агар, кровяной агар, желчный бульон, желточно-солевой агар);
• синтетические (среды известного состава).

По назначению питательные среды классифицируют на:

· диференциально-диагностические накоторых различные виды бактерий дают различный рост;например среды Эндо, Левина, Плоскирева

· элективные или избирательные среды, на которых одни виды бактерий растут, а другие не растут или их рост подавляется. Например, 10% желчный бульон для сальмонелл брюшного тифа, желточно-солевой агар для стафилококков др.

КЛАССИФИКАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

ПРОТОКОЛ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования – взвесь микроорганизмов (х-смесь)

Цель – выделение чистой культуры бактерий из исследуемого материала и идентификация выделенной культуры.

Заключение:

Занятие № 6

ТЕМА: Питание, рост и размножение микробов. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (2 день исследования). Изучение культуральных свойств бактерий.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить рост и размножение бактерий, их культуральные свойства, общие принципы идентификации чистых культур аэробных бактерий.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Что такое культуральные свойства микробов?

2. Что такое «культура», «колония», «штамм».

3. Как изучаются культуральные свойства бактерий на плотной и жидкой средах.

4. Что такое «чистая культура»?

5. Как вы понимаете термины: «рост» и «размножение» бактерий.

6. Зарисуйте и укажите фазы бактерий на жидкой питательной среде.

7. Что такое ростовые факторы бактерий.

8. Какие свойства бактерий изучаются при бактериологическом исследовании для установления вида микробов.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Просмотреть чашки с посевами предыдущего занятия. Изучить культуральные признаки (описать выросшие колонии, пользуясь руководством для лабораторных занятий). Сделать запись в протоколе.

2. Из разных колоний приготовить мазки, окрасить по Граму, промикроскопировать. Результат зафиксировать в протоколе.

3. Произвести посев изученных колоний в пробирки со скошенным агаром для выделения (накопления) чистых культур.

4. Заполнить протокол - второй день бактериологического исследования.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Второй день работы включает изучение колоний, выросших на чашке с СПА, и пересев намеченных колоний на скошенный агар для получения чистых аэробных культур.

На столе у студента имеется чашка с СПА с выросшими на поверхности агара колониями. Изолированные колонии, отличающиеся по внешнему виду, отмечают стеклографом на наружной поверхности стекла чашки, нумеруют: 1,2,3 и т.д.

Каждую отмеченную колонию характеризуют макроскопически: форма, цвет, характер краев, поверхности, прозрачность, размер. Заносят характеристики разных колоний в протокол.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЙ КОЛОНИЙ

1. Размер колоний _________________________________________________

2. Форма колоний__________________________________________________

3. Поверхность колоний_____________________________________________

4. Края колоний____________________________________________________

5. Прозрачность колоний_____________________________________________

6. Пигмент__________________________________________________________

7. Консистенция_____________________________________________________

1. Из колоний грамотрицательных палочек сделать отсев на скошенный агар для получения чистой культуры.

Для этого надо прокалить бактериальную петлю и подождать, пока она остынет (10-15 сек.). Кончиком петли едва коснуться отмеченной колонии, не захватывая агар. После этого взять в левую руку пробирку со скошенным агаром так, чтобы поверхность скошенного агара была перед глазами. Открывать пробирку нужно так, чтобы пробка осталась в правой руке, прижатой мизинцем к ладони. Нельзя класть пробку на стол!Петлю с материалом внести в пробирку не касаясь внутренних стенок, до дна пробирки, где находится большее количество конденсационной жидкости. Поверхностью петли прикоснуться к поверхности агара и сделать посев штрихом, продвигаясь снизу верх.

Обжечь на пламени края пробирки и пробку, закрыть пробирку, поставить ее в штатив. Бактериальную петлю прокалить и также поставить в штатив. Пробирку поместить в термостат при 37ºС.

Занятие № 7

ТЕМА: Ферменты и пигменты бактерий. Бактериологическое исследование аэробов (3-4 день исследования). Изучение биохимических свойств выделенной культуры. Типы дыхания бактерий. Культивирование анаэробных бактерий (бактериологическое исследование почвы).

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить ферментативные свойства выделенной культуры.Изучить способы выделения чистой культуры анаэробных бактерий.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Что такое экзоферменты бактерий? Укажите их роль в жизнедеятельности бактериальной клетки. Приведите пример.

2. Что такое конституитивные и индуктивные ферменты? Когда происходит синтез индуктивных ферментов?

3. Перечислите ферменты бактерий, имеющие значение для их идентификации и дифференциации.

4. Опишите и объясните способ изучения сахаролитических ферментов в МТС и на средах Гисса.

5. Укажите способы изучения протеолитических ферментов микроорганизмов.

6. Какое значение для микробов имеет пигментообразование.

7. Перечислите факторы роста и укажите их роль в метаболитических процессах бактериальной клетки.

8. Приведите классификацию бактерий по типу дыхания.

9. Перечислите методы создания анаэробных условий, необходимых для выращивания анаэробных бактерий.

10. Назовите питательные среды, применяемые для культивирования анаэробов.

11. Укажите принципы идентификации выделенной культуры анаэробов.

12. Характеристика неспорогенных (бактероидов) анаэробов.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Изучить характер роста на скошенном СПА.

2. Определить чистоту культуры, приготовить мазки, окрасить по Граму, промикроскопировать.

3. Определить протеолитические ферменты:

а) произвести посев культуры уколом в столбик желатины, зарисовать в тетрадь различные формы размножения желатины;

б) произвести посев выделенной культуры в СПБ с индикаторными бумажками (определение наличия сероводорода и индола).

4. Определить сахаролитические свойства культуры:

а) произвести посев на среды Гисса, микротестсистему-5У (МТС-5У);

б) зарегистрировать результаты посева на «пестром» ряду;

в)результаты записать в протокол.

5. Дать заключение по проведенному бактериологическому исследованию (заполнить протокол).

6. Разобрать схему бактериологического исследования анаэробов

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Термин «чистая культура» подразумевает, что на питательной среде растет микроб одного вида. Проверка этого положения достигается двумя путями. Макроскопически оценивается однородность роста культуры на скошенном агаре. Более надежной является микроскопическая оценка. Для этого из разных мест выросшей на агаре культуры берут материал, готовят мазок (или мазки) и окрашивают по Граму. Если в полях зрения однородные по форме, расположению и окраске клетки, то это дает основание для заключения, что выделена «чистая культура».
2. Если выделенная культура «чистая», то можно приступить к ее идентификации, т.е. установлению биологического вида микроба.

Установление вида микроба может складываться из различного рода признаков: микроскопических - особенности формы, окраски и расположения клеток в мазке; макроскопических – форма, цвет и другие черты колоний на плотной среде. Наиболее основательными являются биохимические признаки идентификации, характеризующие набор ферментов у данной культуры. Этот признак является наиболее стабильной и индивидуальной характеристикой микроба. Наличие ферментов у микроба чаще всего определяют путем посева «чистой культуры» на среды «пестрого ряда» илимикротестсистемы(МТС), в каждой ячейке которых которого сод