Протокол бактериологического исследования трупа павшей белой мыши

Вскрытие трупа и забор материалов для посева производят сразу после гибели животного, соблюдая правила асептики, чтобы избежать загрязнения материалов посторонними микробами. Труп белой мыши прикрепляют к препаровальной доске брюшком вверх. Кожу обрабатывают спиртом или дезинфицирующим раствором. Во избежание загрязнения содержимым кишечника сначала вскрывают грудную полость. Вскрытие производят стерильными инструментами поэтапно, начиная с продольного разреза кожи по прямой линии от нижней челюсти до лобка. Затем кожу осторожно отсепаровывают в стороны, делая разрезы к лапкам. Отмечают состояние подкожной клетчатки и лимфатических узлов. Если узлы изменены, делают из них мазки-отпечатки и посевы на питательные среды.

Для вскрытия грудной полости делают поперечный разрез под мечевидным отростком и два продольных разреза через рёбра в местах соединения их с хрящами. Откидывают вырезанный лоскут кверху и осматривают органы грудной полости, отмечая наличие экссудата.

Для посева крови из сердца участок его поверхности прижигают раскалённым кончиком пинцета и через него вводят капилляр стерильной пастеровской пипетки в полость сердца. Затем каплю крови из пипетки выдувают в пробирку с сахарным бульоном и на предметное стекло для приготовления мазка.

Из ткани лёгких приготовляют мазки-отпечатки и делают посевы.

Затем вскрывают брюшную полость, осматривают внутренние органы, производят посевы отпечатков из органов на секторы чашки Петри с кровяным агаром. Поверхность органа прижигают раскалённым скальпелем, отрезают кусочек и делают посев отпечатка на кровяной агар. Параллельно готовят мазки-отпечатки из печени, почек, селезёнки (кусочком органа прикасаются поверхностью разреза к предметному стеклу). Мазки-отпечатки фиксируют в смеси Никифорова (спирт и эфир в равных объёмах) и окрашивают по методу Романовского-Гимзе, микроскопируют. Посевы помещают в термостат (t-37º С) на 24-48ч.

Техника приготовления мазков из крови

На чистое обезжиренное стекло ближе к одному из концов помещают каплю крови. Другое предметное стекло, имеющее шлифованный край, прижимают под углом 45˚ к капле крови, а затем скользящим движением передвигают его к свободному концу первого стекла. При этом кровь размазывается по предметному стеклу тонким слоем. Высушивают препарат только на воздухе, фиксируют в жидком фиксаторе ( этиловый и метиловый спирт, смесь Никифорова и др.).

Мазки-отпечатки можно приготовить на одном стекле следующим образом:

● ● - лёгкое

● - печень

● ● ● - селезёнка

● ● ● ● - лимфатический узел

Труп животного после вскрытия сжигают, автоклавируют или кипятят в течение 1-2 часов в растворе фенола. Все инструменты, кювету и доску для фиксации обрабатывают дезинфицирующим раствором или автоклавируют.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования – культура, выросшая на кровяномагаре.

Цель – изучение изменений в органах белой мыши, погибшей от инфекции.

Заключение:

Занятие № 14

ТЕМА: Иммунитет. Виды иммунитета. Неспецифические факторы иммунитета (лизоцим, комплемент). Фагоцитоз. Показатели фагоцитарной активности клеток.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Ознакомиться с видами и формами иммунитета. Изучить методы определения неспецифических факторов защиты и фагоцитоза.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1. Дайте определение понятию «иммунитет».

2. Какие известны виды иммунитета?

3. Перечислите факторы неспецифической резистентности.Какие существуют гуморальные факторы неспецифической резистентности?

5. Что такое лизоцим?

6. Перечислите неспецифические защитные факторы полости рта.

7. Какие клетки обладают фагоцитарной способностью?

8. Из каких фаз состоит фагоцитарный процесс?

9. Что такое незавершенный фагоцитоз?

10. Как определяют фагоцитарный показатель, опсоно-фагоцитарный индекс?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Определить фагоцитарное число и фагоцитарный показатель в опыте invitro.

2. Изучить незавершенный фагоцитоз гонококков по готовому препарату, приготовленного из гнойного отделяемого больного гонореей.

3. Определить титр лизоцима в слюне по демонстрационному материалу.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Иммунитет – совокупность процессов и механизмов, направленных на сохранение постоянства внутренней среды организма от заразного начала и других чужеродных агентов.

Виды иммунитета –видовой и приобретенный. Приобретенный делится на искусственный и естественный. Каждый из них на активный и пассивный.

Фагоцитоз – является одним из основных мощных факторов, обеспечивающих резистентность организма, защиту от чужеродных и инородных веществ, в том числе микробов. Фагоцитоз – это клеточный фактор неспецифической защиты.

НЕЗАВЕРШЕННЫЙ ФАГОЦИТОЗ(рисунок)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРА ЛИЗОЦИМА (рисунок)

Занятие № 15

ТЕМА: Антигены. Антитела. Серологические реакции. Реакция агглютинации. РПГА. Реакция преципитации и ее варианты.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить серологические методы диагностики инфекционных заболеваний. Изучить различные методы постановки реакции агглютинации, РПГА.Изучить различные методы преципитации и нейтрализации.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1. Дайте определение понятиям «антиген» и «антитело».
2. Каковы основные свойства антигена?

3. Что такое гаптен и его отличие от полноценного антиген?

4. Что такое детерминантная группа и валентность антигена?

5. Гетероантигены, изоантигены, аутоантигены.

6. Химическая природа антител. Классы иммуноглобулинов и их характеристика.

7. Какие ингредиенты участвуют в реакции агглютинации?Для чего нужен контроль при постановке реакции агглютинации?

8. Какие варианты реакции агглютинации Вы знаете?

9. Ингредиенты реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больного.Что такое диагностикум? Как приготовить «О» и «Н» диагностикум?

10. Какие ингредиенты необходимы для постановки РПГА?

11. Что такое диагностический титр серологической реакции?

12. Какая реакция применяется для выявления неполных антител?

13. Методы постановки реакции преципитации.

14. Применение реакции преципитации в медицине (реакция Асколи, реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини и др.).

15. Каковы ингредиенты (компоненты) реакции нейтрализации токсина?Получение и применение антитоксических сывороток.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле для определения вида микроба.

2. Составить схему постановки развернутой реакции агглютинации.

3. Поставить развернутую реакцию агглютинации. Пробирки поместить в термостат на 2 часа ( 1 этап).

4. Произвести учет развернутой реакции агглютинации. Дать заключение.

5. Составить схему реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

6. Поставить РПГА.

7. Составить схему и поставить реакцию кольцепреципитации (на примере реакции Асколи).

8. Изучить реакцию преципитации в геле (определение токсигенности дифтерийной культуры), зарисовать.

9. Составить схему реакции флокуляции.

10. Учет результатов реакции флокуляции, поставленной с целью титрования антитоксической сыворотки.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Антиген –биополимерные, органические соединения (белки, полисахариды и др.), которые несут признаки генетически чужеродной информации и вызывают в макроорганизме развитие специфических иммунологических реакций.

Антитело –представляет собой иммуноглобулины, образующиеся в организме человека и животных, как ответная реакция на введение антигенов и выполняющие защитную функцию.

Классы иммуноглобулинов -

IgA

IgG

IgM

IgD

IgE

Реакция агглютинации - существует 2 основных метода проведения реакции:

• Проведение реакции на стекле (ориентировочная)
• Развернутая реакция агглютинации (в пробирках)

СХЕМА ПОСТАНОВКИ ОРИЕНТИРОВОЧНОЙ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ

НА СТЕКЛЕ И УЧЕТ РЕАКЦИИ(рисунок).

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РАЗВЕРНУТОЙ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ

И УЧЕТ РЕАКЦИИ(рисунок).

Реакцию пассивной гемагглютинацииставят обычно в лунках плексигласовой (пластмассовой) панели.

Ингредиенты: сыворотка больного; физиологический раствор; эритроцитарныйдиагностикум.

СХЕМА РЕАКЦИИ ПАССИВНОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ И ЕЕ УЧЕТ (рисунок).

Реакция преципитации –существует несколько методов постановки.

В практической медицине реакция кольцепреципитации применяется для обнаружения антигена. Реакция основана на том, что при наслаивании прозрачного экстракта, содержащего антиген (преципитиноген) на иммунную сыворотку (антитела – преципитины) на границе обеих жидкостей образуется преципитат – диск в виде кольца (в пробирке).

Определение токсигенности «invitro»по методу Оухтерлони.Реакция преципитации в геле позволяет определить токсигенность дифтерийной палочки.

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ КОЛЬЦЕПРЕЦИПИТАЦИИ (рисунок).

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ В ГЕЛЕ

(ПО ОУХТЕРЛОНИ) (рисунок)

Занятие № 16

ТЕМА: Реакции лизиса (бактериолиз, гемолиз). Реакция связывания комплемента (РСК).

Реакция Кумбса, ИФА, РИФ. Программированный контроль.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить методы постановки реакций лизиса, РСК, РИФ, ИФМ, РИМ.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1. Какие ингредиенты участвуют в реакциях лизиса (бактериолиз, гемолиз, лейколизис).

2. Феномен Исаева-Пфеффера (реакция бактериолиза «invivi»).

3. Какие ингредиенты участвуют в РСК&

4. Какими компонентами представлена гемолитическая (индикаторная) система?

5. Если конечным результатом РСК является гемолиз в опытной пробирке – реакция положительная или отрицательная?

6. Практическое применение РСК.

7. РИФ, ее варианты, прямой и непрямой методы.

8. Практическое применение РИФ.

9. Иммуноферментный метод, сущность, практическое применение.

10. Радиоиммунный метод (РИМ), практическое применение.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

Поставить реакцию гемолиза.

2. Составить схему реакции бактериолиза «invitro».

3. Поставить основной опыт РСК.

4. Учесть результаты готовых реакций гемолиза и РСК.

5. Составить схему иммуноферментного метода.

6. Поставить прямой метод РИФ для индикации возбудителя
(демонстрация).

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Реакция связывания комплемента –применяется для обнаружения комплементсвязывающих антител в сыворотке крови при инфекционныхзаболеваниях (сифилис, гонорея, токсоплазмоз, вирусные инфекции и т.д.).

Реакция бактериолизисаиспользуется для определения специфических бактериолизинов в сыворотках больных (при холере, брюшном тифе, спирохетозных инфекциях).

Реакция иммунофлюоресценции–метод основан на способности некоторых флюорохромов (изотиоционатфлюоресцеина, родамин, акридиновый желтый и др.) вступать в химическую связь с сывороточными белками без нарушения их иммунологической специфичности. Существуют прямой и непрямой варианты РИФ. Антигены или антитела мечены пероксидазой хрома или щелочной фосфатазой.

Радиоиммунный метод –применяется как для выявления антигена, так и для выявления антител. Антигены, либо антитела, мечены радиоизотопом. РИМ используется для диагностики вирусного гапатита, ротавирусной и других вирусных и бактериальных инфекций.

Иммуноферментный метод- дает возможность:

• Определять антитела с помощью меченых ферментов антиглобулинов (непрямой метод);
• Выявлять антиген методом «двойных» антител;
• Определять антиген методом конкуренции меченого антигена.

Используется метод для диагностики инфекционных заболеваний.

Реакция Кумбсаприменяется для обнаружения неполных антител.

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ БАКТЕРИОЛИЗА (рисунок)

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (рисунок)

\

Занятие № 17

ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ.

Занятие № 18

ТЕМА: Микробиологическая диагностикапневмококковых,менингококковых и гонококковых инфекций.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить методы микробиологической диагностики пневмококковых, менингококковых и гонококковых инфекций.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1. Каковы морфологические и тинкториальные свойства пневмококков? Укажите значение капсулы пневмококка.

2. Каковы особенности антигенной структуры пневмококков? Как определить серовар пневмококка?

3. Какие заболевания могут вызвать пневмококки?

4. Каковы морфологические, тинкториалные и культуральные свойства менингококков и гонококков? В чем отличие их биохимических свойств?

5. Какие заболевания могут вызвать менингококки?

6. Какие микроорганизмы(кроме менингококков) могут вызвать воспаление спинномозговых оболочек?

7. Какова резистентность менингококков и гонококков к факторам внешней среды?

8. Назовите методы микробиологической диагностики острой и хронической гонореи.

9. Что такое бленорея? Могут ли болеть бленореей взрослые?

ЗАДАЧИ

1. На прием к врачу явился больной А. 25 лет, с жалобами на обильное гнойное отделяемое из уретры.

а) какое заболевание Вы заподозрите? Какой анализ порекомендуете сделать?

б) в мазке из гнойного отделяемого уретры обнаружены грамотрицательные диплококки, расположенные внеклеточно и внутриклеточно. Какой диагноз поставите?

2. Больной жалуется на длительные выделения гноя из уретры, рези и боли при мочеиспускании. Вы предполагаете хроническую гонорею. Какими микробиологическими методами можно подтвердить этот диагноз?

3. Детей из детского сада нужно обследовать на носительство менингококка. Какой материал подлежит исследованию? На какие питательные среды необходимо засевать этот материал?

4. В больницу поступил больной с клинической картиной менингита. При пункции получена мутная спинномозговая жидкость:

а) какие меры предосторожности следует соблюдать при транспортировке ликвора в лабораторию в холодное время года.

б) в мазке из осадка спинномозговой жидкости обнаружены диплококки. Какой

вы поставите диагноз? Как дальше продолжите исследование ликвора?

5. В спинномозговой жидкости больного ребенка обнаружены Г+ ланцетовидные диплококки, окруженные капсулой. Каков ваш предположительный диагноз?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Составить направление в лабораторию к материалу, взятому у больных пневмонией.(гонореей и менингитом).

2. Вскрыть труп белой мыши, ранее зараженной мокротой больного пневмонией, произвести посев на сахарный бульон, сделать мазки – отпечатки из органов, покрасить по Граму, промикроскопировать. Дать заключение.

3. Промикроскопировать мазки из отделяемого уретры больного гонореей, описать,дать заключение.

4. Разобрать схему реакции Борде – Жангу (РСК), учесть результаты (демонстрация) и дать заключение.

Дифференциальные признаки пневмококков и стрептококков

ПРОТОКОЛ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ КРОВИ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ (ДИАГНОЗ – СЕПСИС)

Материал исследования – кровь

Цель – выделение чистой культуры, и ее идентификация

Заключение:

Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций (схема)

Микробиологическая диагностика гонореи (схема)

Микробиологическая диагностика эпидемического менингококкового менингита (схема)

Занятие № 19

ТЕМА: Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций: столбняка, газовой гангрены, ботулизма. Неспорообразующие анаэробы.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить методы микробиологической диагностики столбняка,газовой гангрены, ботулизма.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1. Какие Вы знаете анаэробные инфекции? Почему их относят к токсинемическим? Укажите латинские названия возбудителей этих инфекций.

2. Где сохраняются спорогенные анаэробы в окружающей среде?

3. Какие основные микробиологические методы используют для диагностики анаэробных инфекций?

4. Каков механизм заражения и каковы особенности патогенеза при газовой гангрене?

5. Какова природа токсина столбнячной палочки и на что он действует?

6. Чем отличается картина столбняка у человека и у мелких лабораторных животных?

7. Какие типы токсина продуцирует возбудитель ботулизма и что поражает токсин?

8. Какие условия способствуют размножению возбудителя ботулизма и накоплению токсина в пищевом продукте?Какие продукты чаще всего являются причиной отравления?

9. Какие специфические препараты применяют для лечения и профилактики газовой гангрены, столбняка, ботулизма?

10. Какие Вы знаете неспорогенные анаэробные бактерии?

ЗАДАЧИ

1. В клинику поступил больной с обширным ранением нижних конечностей. Какой препарат следует применить с целью профилактики газовой гангрены?

2. Пробу почвы засеяли на среду Китта-Тароцци. Выросшую в бульоне культуру ввели мышке у корня хвоста. Через сутки хвост встал «трубой», развились контрактуры мышц и мышь погибла. От чего погибла мышь?

3. Работая в огороде, женщина поранила лопатой ногу. Какие профилактические препаратыследует назначить больной после хирургической обработки раны?

4. Мальчик 12 лет, ученик школы №13, упал с дерева и глубоко поранил руку. Нужно ли вводить этому мальчику препараты для профилактики столбняка?

5. У больного подозревается ботулизм.

а) какой материал постараетесь взять на исследование? Какими методами будете проводить микробиологическую диагностику?

б) в чем будет заключаться специфическое лечение и профилактика этого заболевания?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Изучить (разобрать) схемы микробиологической диагностики газовой гангрены, столбняка, ботулизма.

2. Произвести посев исследуемого материала (раневого отделяемого) на среду Китта-Тароцци. Прогреть засеянные среды при температуре 80º С для уничтожения неспоровой микрофлоры.

3. Выделение чистой культуры по способу Вейнберга-Перетца.

4. Посев на пестрый ряд для биохимической идентификации выделенной культуры. Реакция нейтрализации экзотоксина противогангренозными антитоксическими сыворотками на белых мышах.

5. Заполнить протокол, дать заключение.

6. Ознакомиться по демонстрационному материалу с препаратами для диагностики, лечения и профилактики анаэробных инфекций(газовой гангрены, ботулизма, столбняка)

ПРОТОКОЛ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования – раневое отделяемое

Цель – выделение чистой культуры и ее идентификация

Заключение:

Микробиологическая диагностика газовой анаэробной инфекции (схема)

Занятие №20

ТЕМА: Микробиологическая диагностика дифтерии, коклюша.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить методы микробиологической диагностики дифтерии и коклюша.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1. Укажите латинское название возбудителя дифтерии.

2. Каковы морфологические и тинкториальные особенности возбудителя дифтерии?

3. Назовите биовары дифтерийной палочки. По каким признакам их дифференциируют?

4. Какие микробилогичекие методы применяют для диагностики дифтерии?

5. Какой материал подвергают бактериалогическому исследованию с целью диагностики дифтерии и для выявления дифтерийного бактерионосительства?

6. По каким признакам отличают дифтерийную палочку от дифтероидов?

7. Как определяют токсигенность возбудителя дифтерии?

8. Каковы пути и способы заражения дифтерией?

9. В чем проявляется положительная проба Шика и о чем она свидетельствует?

10. Какие бактерии относятся к роду Bordetella?

11. Какие микробиологические методы применяют для диагностики коклюша?

12. Какие иммунопрепараты применяют для специфической профилактики дифтерии и коклюша?

ЗАДАЧИ

1. При посеве слизи из зева на теллуритовую среду получены серовато-черные колонии с зубчатым краем. Выделенная культура расщепляет глюкозу, цистин, а также крахмал, гликоген и декстрин. Какой это вариант дифтерийной палочки?

2. При оформлении на работу в детсад воспитательница Иванова А.П. проходила медицинское обследование. При бактериологическом исследовании слизи из носа у нее выделена палочка Леффлера (V.mitis). Можно ли Ивановой приступить к работе, если все остальные анализы в норме?

3. В городе отмечено несколько случаев дифтерии. В этой связи решено проверить наличие противодифтерийного иммунитета в различных детских коллективах:

а) какими методами и с помощью каких реакций Вы это сделаете?

б) исследование показало, что антитоксический иммунитет у большинства детей низкий. Каковы Ваши дальнейшие мероприятия?

4. В детском интернате мальчик заболел дифтерией:

а) какие специфические препараты назначите для лечения больного?

б) какие препараты Вы примените для профилактики контактировавших детей?

5. В детскую поликлинику привели ребенка, страдающего приступами спазматического кашля. Какое заболевание Вы заподозрите? Как возьмете материал для посева? Какие среды можно использовать для посева?

6. Ребенок длительно кашлял, причем приступы носили спазматический характер и заканчивались выделением большого количества вязкой мокроты, а иногда и рвотой. Как установить, перенес ли ребенок коклюш, т.е. как провести ретроспективную диагностику?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Пользуясь таблицами, зарисовать в тетради схемы микробиологической диагностики дифтерии и коклюша.

2. Бактериоскопия мазков дифтерийной и ложно-дифтерийной палочек со среды Леффлера. Окраска по Граму, Нейссеру.

3. Ватным тампоном произвести забор материала из зева и носа с целью выявления дифтерийного бактерионосительства среди студентов, затем произвести посев исследуемого материала на среду Леффлера.

4. Ознакомиться с питательными средами, используемыми для выращивания дифтерийной палочки (демонстрационный материал).

5. Изучить биохимические свойства и тесты дифференциации дифтерийной палочки от ложнодифтерийной (демонстрационный материал), таблица.

6. Заполнить протокол бактериологического исследования, дать заключение.

Дифференциальные признаки дифтерийной палочки и дифтероидов

ПРОТОКОЛ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ НА ДИФТЕРИЙНОЕ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВО

Материал исследования – мазок из зева

Цель – установить наличие дифтерийной палочки

Заключение:

Микробиологическая диагностика дифтерии (схема)

Микробиологическая диагностика коклюша (схема)

Занятие № 21

ТЕМА: Микробиологическая диагностика туберкулеза.Микобактериозы.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Изучить методы микробиологической диагностики туберкулеза.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1. Назовите возбудителей туберкулеза и проказы.

2. Какие Вы знаете условно-патогенные микобактерии?

3. Каковы морфологические и тинкториальные особенности возбудителей туберкулеза?

4. На каких питательных средах и как растут туберкулезные палочки?

5. Каковы пути заражения и особенности патогенеза туберкулеза?

6. Какие микробиологические методы применяют для диагностики туберкулеза?

7. Как осуществляется бактериоскопическая диагностика туберкулеза? В чем заключается метод обогащения исследуемого материала?

8. Как осуществляется ускоренная диагностика туберкулеза (метод микрокультур)?

9. Какие лабораторные животные наиболее чувствительны к туберкулезной палочке?

10. Каковы особенности иммунитета при туберкулезе?

11. Какая вакцина используется для активной профилактики туберкулеза? Кем и как она была создана?

12. Каково значение туберкулиновых проб в диагностике туберкулеза? Расшифруйте, что такое РРD?

13. Какие микробиологические методы используют для диагностики проказы?

ЗАДАЧИ

1. При рентгенологическом исследовании в легких обнаружен инфильтрат. Подозревают туберкулез легких.

а) при бактериоскопическом и бактериологическом исследовании мокроты микобактерии туберкулеза не обнаружены. Исключает ли это туберкулез легких у данного больного? Какой метод микробиологической диагностики более чувствительный? Как Вы его проведете?

б) после п/к введения морской свинке мокроты больного, животное погибло после заражения через 1,5 месяца. На вскрытии обнаружены казеозные паховые лимфоузлы и увеличенная селезенка, на поверхности которой несколько желтоватых бугорков. Как вы будете расценивать эту биологическую пробу? Какой диагноз поставите больному на основании этой пробы

2. В клинику поступил больной с жалобами на боли при мочеиспускании и кровь в моче. При бактериологическом исследовании осадка мочи обнаружены кислотоустойчивые палочки. Как Вы будете расценивать эту находку? Поставите ли Вы больному диагноз «туберкулез почек» на основании этих данных. Если нет, то какое исследование мочи Вы порекомендуете провести? Какие кислотоустойчивые сапрофитные палочки могут присутствовать в моче?

3. Двухлетний ребенок имел контакт с больным туберкулезом легких. Как выяснить заразился ли он, т.е. инфицирован ли он?

4. При посеве мокроты на среду Левенштейна-Йенсена через 4 дня обнаружены гладкие, влажные колонии желтого цвета. Из колоний сделан мазок и окрашен по Цилю-Нильсену. При бактериоскопии мазка обнаружены кислотоустойчивые палочки. Какое Вы дадите заключение? Получен ли рост микробактерий туберкулеза или нет?

5. У подростка 16-ти лет реакция Манту в разведении 1:2000 отрицательная. Подлежит ли он ревакцинации? Можно ли ревакцинировать взрослых с отрицательными туберкулиновыми кожными реакциями?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Разобрать схему лабораторной диагностики туберкулеза.

2. Приготовить мазок из мокроты больного. Окрасить по Цилю-Нильсену, промикроскопировать, зарисовать в тетрадь, дать заключение.

3. Изучить характер роста туберкулезных микобактерий на питательных средах.

4. Заполнить протокол.

Метод гомогенизации и осаждения

К суточной порции мокроты добавляют равный объем 1% раствора едкого натра для гомогенизации, флакон плотно закрывают пробкой и встряхивают 10-15 мин. После центрифугирования и нейтрализации кислотой из осадка приготавливают мазки и окрашивают по Цилю-Нильсену.

Метод флотации

Мокроту гомогенизируют и прогревают при 55ºС в течение 30 мин. на водяной бане. Затем добавляют 1-2 мл ксилола, дистиллированную воду, повторно встряхивают в течение 10 мин и отстаивают около 20 мин при комнатной температуре. На поверхности образуется пена, которая состоит из всплывших капелек с адсорбированными микробами. Петлёй из пенообраз