Определение бактерий группы кишечной палочки в мясе, колбасных изделиях, рыбе.

Цель определения бактерий этой группы – проверка соблюдения режима варки колбас или санитарно-гигиенических условий в процессе производства сырокопченых колбасных изделий.

Анализ на БГКП проводят с использованием сред, содержащих углеводы (глюкоза, лактоза). К ним относятся среды Хейфеца, ХБ, КОДА, Кесслер. БГКП ферментируют глюкозу и лактозу с образованием кислых продуктов, поэтому в средах Хейфеца, ХБ и КОДА меняется цвет индикаторов, а в среде Кесслер в поплавке образуется газ вследствие расщепления глюкозы.

Определение бактерий группы кишечной палочки определяют по наличию характерного роста окрашенных колоний на селективных средах (Эндо, Плоскирева, Смирнова) вследствие ферментации лактозы этих сред лактозоположительными штаммами кишечной палочки. На среде Эндо бактерии группы кишечной палочки растут в виде красных с металлическим блеском или без него колоний, а таеже в виде розовых с красным центром колоний без изменения цвета среды. На среде Плоскирева колонии кирпично-красные (брусничного цвета) с глянцевой поверхностью. На среде Смирнова образуют полупрозрачные колонии желтого цвета.

Ход определения

1. Определяем по СанПиНу в каком количестве средней пробы не должно быть бактерий группы кишечной палочки (см. приложение 1,2).
2. Готовим разведения, как при определении КМАФАнМ
3. Из нужного разведения 1 см³ взвеси вносим в пробирки со средой Кесслера (5 см³) и средой КОДА (5 см³). Посев производим в повторах, по одной пробирке каждой среды оставляем без посева в качестве контроля.
4. Пробирки помещаем в термостат при 37⁰С.
5. Если через 18-22 ч в поплавке на среде Кесслер нет воздуха, а цвет среды КОДА не изменился, значит БГКП не обнаружены в данном разведении.
6. Если в поплавке на среде Кесслер образуется газ, среда светлеет, а среда КОДА меняет цвет с зеленого на желтый, то такие пробы отсевают на среду ЭНДО. Эта среда представляет собой фуксин сульфитный агар, приготовленный на основе МПА с добавлением фуксина, лактозы и водного раствора сульфита натрия. Для получения изолированного роста колонии по рекомендации В. С. Закардонец посевной материал вначале надо распреде­лить на поверхности среды у одного края чашки в виде площадки размером 0,5 х 1-1,2 см, а затем проводить посев частыми штри­хами на расстоянии 1-2 мм один от другого по всей чашке. При таком методе первичного посева даже массивное об­семенение материала различной микрофлорой не является пре­пятствием для получения изолированных колоний (рис. 1, а).
7. Можно также применить модифицированный метод дробного посева по Дригальскому на плотной среде в одной чашке, разделен­ной на 3 сектора. Техника посева следующая. Бактериологической петлей, смоченной надосадочной жидкостью гомогенизата, по поверх­ности среды первого сек­тора делают 4-5 отдель­ных штрихов. Петлю об­жигают, охлаждают, за­тем, проведя один раз поперек предыдущего посева, делают 4-5 от­рывистых штрихов во втором секторе. После этого вновь прожженной и охлажденной петлей наносят штрихи а – с площадкой; б - дробно по секторам.

а б

Рис. 1. Схема посева материала для получения

изолированного роста колоний на плотной среде.

1. Среду ЭНДО помещаем в термостат (t = 37⁰С) на 20-24 часа. На среде ЭНДО бактерии группы кишечной палочки образуют темно-красные колонии с металлическим блеском или без него.
2. Из колонии делаем мазок, который окрашиваем по Грамму. Если при микроскопировании обнаруживаем короткие грамотрицательные неспорообразующие палочки, то делаем вывод о присутствии бактерий группы кишечной палочки в исследуемом продукте.
3. Из нескольких ставим вторую бродильную пробу.
4. Микробиологической петлей берем микроорганизмы разных колоний и помещаем их в жидкую среду с глюкозой. Одну пробирку оставляем без посева – контроль.
5. Оставляем пробу в термостате при 37⁰С до следующего дня.
6. Обнаружение грамотрицательных не образующих спор палочек, образующих характерные колонии, вызывающих помутнение сред с глюкозой и образование в них газа, указывает на наличие бактерий группы кишечной палочки.

Контрольные вопросы:

1. Какие дифференциально-диагностические среды, применяются для выделения E. сoli?

2. Какие микроорганизмы входят в состав БГКП?

3. О чем свидетельствует наличие БГКП в продукте питания?

4. Какие морфологические свойства кишечной палочки?

5. Почему БГКП считаются важнейшими санитарно-показательными микроорганизмами?