ОПРЕДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА SALMONELLA В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Сальмонеллы – факультативные анаэробы, температурный оптимум 35-37⁰С, рН 6,5-7,5. Хорошо растут на простых питательных средах. С целью выделения возбудителя из материала делают посев на одну из сред обогащения (Мюллера, Кауфмана, Киллиана, селенитовый или магниевый бульон). Наиболее часто применяют среду Мюллера, содержащую тиосульфат натрия и раствор Люголя. Образующийся при их взаимодействии тетратионат натрия (Na₂SO₄O₃) является ингибитором посторонней микрофлоры. Кроме того, в среду для увеличения ее буферных свойств добавляют мел. Часто используют селенитовую среду, содержащую в качестве ингибитора гидроселенит натрия (NaHSeO₃).

На МПА сальмонеллы образуют круглые, выпуклые, влажные, прозрачные, нежные, голубоватые колонии. На среде ЭНДО сальмонеллы формируют слегка розоватые, прозрачные колонии; на среде Плоскирева – бесцветные, более мутные; на среде Левина – прозрачные, иногда с фиолетовым оттенком; на висмут-сульфитном агаре – черные с металлическим блеском.

Среда Плоскирева является дифференциально-диагностической средой для выделения сальмонелл. В состав среды входят ингибиторы (желчные соли, бриллиантовый зеленый, йод) поэтому она полностью подавляет рост грамотрицательной микрофлоры и задерживает в первые 24 часа рост эшерихий и протея. Селективное действие основано на присутствии в среде лактозы и индикатора – нейтрального красного, поэтому лактопозитивные бактерии (Е.сoli и т.д.) образуют колонии брусничного цвета, а лактозоотрицательные (сальмонеллы) - бесцветные.

Висмут-сульфитный агар строго селективная среда для диагностики сальмонелл. В готовом виде она зеленоватого цвета, непрозрачная, содержит ингибиторы – бриллиантовый зеленый и висмута сульфит, задерживающие рост многих энтеробактерий. Рост сальмонелл на этой среде замедленный, поэтому посевы просматривают через 24-48 часов. Дифференцирующее действие среды основано на том, что образуемый сальмонеллами сероводород при взаимодействии с бесцветным сульфитом переводит его в черный цвет. Бактерии, не образующие сероводород, вырастают в виде бесцветных, зеленоватых или коричневатых колоний.

Сальмонеллы образуют сероводород, ферментируют глюкозу, не расщепляют лактозу, салицин, сахарозу, адонит, дают положительную реакцию с метиловым красным, утилизируют цитрат в среде Симмонса, не образуют индол, дают отрицательную пробу Фогес-Проскауера.

Биохимические свойства ряда сальмонелл достаточно характерны, что позволяет дифференцировать эти бактерии до вида. Если изучаемая культура соответствует по ферментативной активности основным признакам сальмонелл (табл. 2), то ее исследуют в РА (реакции агглютинации) с сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками.

Таблица 2

Основные дифференцирующие признаки сальмонелл, эшерихий и энтеробактерий

+ положительная реакция; – отрицательная реакция; Х – поздняя и не постоянно положительная реакция.

В составе клеток сальмонелл имеются термостабильные соматический О-антиген и жгутиковый Н-антиген.

Соматические антигены неоднородны. По их общности все сальмонеллы, согласно классификации Кауфман-Уайта (1979), подразделены на 65 серологических групп. Сальмонеллы каждой группы имеют общий О-антиген (рецептор). Каждый рецептор О-антигена обозначается арабской цифрой: 1, 2, 3 и т.д. Так например, S.pul1orum имеет в составе О-антигена рецепторы 1, 9, 12, а S.typhimurium - рецепто­ры 1,4,5, 12 и т.д.

Жгутиковые антигены также неоднородны и могут состоять из специфического антигена, характерного только для этого типа и общего, группового, встречающегося у других сальмонелл этой группы. Типоспецифический Н-антиген называется первой фазой и обозначается прописными буквами латинскоrо алфавита (А, В, С и т.д.). Группоспецифический Н-антиген называют второй фазой и 'обозначают арабскими цифрами (1, 2, 3 и т.д.) или прописными буквами латинского алфавита с арабскими цифрами. Сальмонеллы могут быть двухфазными, содержащими антигены, и 1 и 2 фазы, однофазными.

Антигенную формулу каждого типа сальмонелл пишут с указание всех О- и Н-антигенов. Например: «S.abortus-ovis 4, 12, : С : 1, 6», что означает наличие О-антигена в виде рецепторов 4 и 12, специфического Н-антигена 91 (фаза), обозначаемого буквой С, и группового Н-антигена (2 фаза), обозначаемого цифрами 1, 6.

Значение имеют сальмонеллы серогрупп В, С, С₂, Д, Е. В группу В включена S.typhimurium ­возбудитель сальмонеллеза уток и ryсей, в серогруппу С – S. typhisuis – возбудитель сальмонеллеза свиней и пищевых токсоинфекций у человека. В группу - Д входят S.dubIin - возбудитель сальмонеллеза телят.

Сальмонеллезные агглютинирующие сыворотки в настоящее время выпускают в виде восьми О-компонентных сывороток; содержащих антитела против различных сочетаний рецепторов, Н-сыворотки имеют антитела против рецепторов 1 (специфической) или 2 (неспецифической) фаз антигена.

Реакцию агглютинации ставят следующим образом. На чистое предметное стекло наносят каплю неразведенной сыворотки, затем бактериологической петлей вносят 20-24-часовую агаровую культуру. Петлю с бактериальной массой вначале смачивают в капле сыворотки, содержимое тщательно растирают рядом с каплей, затем смешивают с сывороткой. Агглютинация наступает через 1-2 минуты. О-агглютинат имеет вид мелких, плотных комочков, Н-агглютинат ­крупных, легко разбивающихся хлопьев. В настоящее время отечественная промышленность выпускает наборы сальмонеллезных О-поливалентных и О- и Н-монорецепторных сывороток, позволяющих определить 33 серологические группы сальмонелл.

Сначала культуру проверяют с комплексными О-сыворотками и исходя из полученных результатов, относят ее, к той или иной О-серологической группе,.

После установления О-группы культуру испытывают сначала с монорецепторными Н-сыворотками I фазы, а затем - второй.