Глава 4. Обсуждение результатов

По результатам исследуемой группы выявлен высокий уровень встречаемости полиморфных ДНК-маркеров, влияющих на развитие репродуктивной недостаточности при тромбофилии в генах ингибитора активатора плазминогена — PAI-1, гликопротеина–ITGA2 и метилтетрагидрофолатредуктазы — MTHFR. Также определена низкая распространенность мутаций полиморфных локусов генов II и V плазменных факторов свертывающей системы крови — F2 и F5 . У исследуемых женщин с осложнениями гестации и при физиологическом течении беременности не выявлено значимых различий частот полиморфизмов F2 и F5. Сделанные выводы о частоте распространения изучаемых полиморфизмов соответствуют литературным данным, т.к. для европейской популяции частота встречаемости мутаций в генах II и V плазменных факторов свертывающей системы крови составляет: для F2 1-3%, для F5 2-6% [16].

По итогам проведенного исследования был проведен анализ генетических ассоциаций вышеперечисленных полиморфизмов при сравнении исследуемой группы с группой условно здоровых доноров. Основываясь на информации о данном заболевании, можно сказать, что главный фактор наследственной предрасположенности тромбофилии представляет собой совокупность действий комплекса генов, умеющих определять характер ключевых индивидуальных иммунологических и биохимических процессов [33].

При исследовании полиморфизмов rs1799786 гена PAI-1, rs1800790 гена FGB , rs5918 гена GPIIIa, rs1799963 гена F2 не было установлено генетических ассоциаций с повышенным риском развития тромбофилий. У первых трех полиморфизмов распределение частот генотипов в контрольной группе не соответствовало равновесию Харди-Вайнберга, а при исследовании полиморфизма rs1799963 гена F2 показатель достоверности различий был равен 0,65 (больше 0,05), что во всех случаях свидетельствует о невозможности проведения дальнейшей статистической обработки данных.[32]

При исследовании полиморфизма rs1126643 гена ITGA-2 выявлена ассоциация аллеля Т с повышенным риском развития тромбофилии и тромбозов. Наличие аллеля Т, что является патологией, повышает риск развития данного заболевания в 15 раз (OR=15,03, 95%CI: 7,20 – 31,35, р<0,001). Повышенная частота аллеля Т гена ITGA-2 в группе пациенток с репродуктивной дисфункцией свидетельствует о том, что аллель Т является генетическим маркером и фактором риска по исследуемому заболеванию. Опираясь на литературные источники, можно утверждать, что наличие аллеля Т свидетельствует о усиленном развитии тромбоэмболии во время беременности, усиливает риск развития инфарктов миокарда, а также ишемического инсульта [35].

Также установлено, что в исследуемой группе чаще встречался генотип ТТ и генотип СТ полиморфизма rs1126643 гена ITGA-2, чем в контрольной. Это говорит о том, что в группе женщин с репродуктивной дисфункцией обнаружена ассоциация генотипа ТТ и генотипа СТ полиморфизма rs1126643 гена ITGA-2 с повышенным риском развития тромбофилии, что соответствует литературным данным о увеличении скорости адгезии тромбоцитов в случае наличия данных вариаций генотипа. При увеличении скорости адгезии растет потенция к тромбообразованию, что несет за собой ряд тромбоэмболических осложнений[35]. У носителей патологии - генотипа ТТ риск развития тромбоэмболии и тромбозов увеличивается в 24 раза (OR=24,10; 95%CI: 3,15 – 184,68, р<0,001), а гетерозиготный генотип СТ увеличивает риск заболевания у пациенток в 10 раз (OR=9,81; 95%CI: 4,06 – 23,69, р<0,001), соответственно.

При исследовании полиморфизма rs6025 гена F5 выявлена ассоциация аллеля А с повышенным риском развития тромбофилии. Аллель А является генетическим маркером и фактором риска по исследуемому заболеванию, что соответствует литературным источникам по изучению данного полиморфизма. Ассоциация аллеля А, как с ДНК-маркером данного заболевания, увеличивает риск развития тромбоэмболии, способствует риску развития ишемического инсульта, тромбозов, тромбоэмболических осложнений во время беременности [16]. Мутация в гене F5 (наличие аллеля А) повышает риск развития данного заболевания в 13,5 раз (OR=13,47; 95%CI: 0,75–240,98, р=0,01).

Установлено, что в исследуемой группе генотип G/А полиморфизма rs6025 гена F5 чаще встречался, чем в контрольной. Следовательно, в группе с репродуктивной дисфункцией обнаружена ассоциация генотипа G/А полиморфизма rs6025 гена F5 с тромбофилией, являющейся одним из основных факторов развития репродуктивной дисфункции. Гетерозиготный генотип GА полиморфизма rs6025 гена F5 повышает риск развития тромбофилии в 14 раз (OR=13,97; 95%CI: 0,77 – 251,97, р=0,04). Патологий не было обнаружено ни в одной из групп.

При исследовании полиморфизма rs1801133 гена MTHFR(677) выявлена ассоциация аллеля Т с повышенным риском развития тромбофилии. Согласно литературным источникам , минорный аллель Т является генетическим маркером и фактором риска развития тромбоэмболических осложнений и тромбофилии, а частота его встречаемости в европейской популяции равна 30% [23]. Наличие аллеля Т, что является патологией, повышает риск развития данного заболевания у исследуемых мною женщин в 5 раз (OR=5,34; 95%CI: 2,66 – 10,74, р<0,05).

Установлено, что в исследуемой группе чаще встречались генотип Т/Т полиморфизма rs1801133 гена MTHFR(677) и генотип С/Т полиморфизма rs1801133 гена MTHFR(677), чем в контрольной. Следовательно, это говорит нам о том, что в группе пациенток с репродуктивной дисфункцией обнаружена ассоциация генотипа С/Т и генотипа Т/Т полиморфизма rs1801133 гена MTHFR(677) с тромбофилией, являющейся одним из основных факторов развития репродуктивной недостаточности. Опираясь на литературные источники, хочется заметить, что носители генотипа Т/Т имеют повышенный риск развития сердечно-сосудистых заболеваний, т.к. гомоцистеин, содержащийся в высоких количествах увеличивает вероятность развития тромбоза и атеросклероза. Гомоцистеин, имеющий свойство накапливаться в организме, раздражает внутреннюю стенку артерии, тем самым повреждая ее. Происходит разрыв эндотелия, и на поврежденный участок насаживаются кальций и холестерин, тем самым формируя атерoсклеротическую бляшку. Такая бляшка способствует снижению просвета сосуда, в некоторых случаях его закупорке, что и является причиной различных тромбоэмболических осложнений [22]. Гетерозиготный генотип СТ повышает риск развития тромбофилии у его носительниц в 5,5 раз (OR=5,59; 95%CI: 2,48 – 12,63, р<0,05). А наличие патологии - генотипа ТТ свидетельствует о риске развития тромбозов и тромбоэмболий, увеличенном в 6 раз (OR=6,38; 95%CI: 0,75– 54,13, р<0,05), соответственно. Пациентки, имеющие генотипы С/Т и Т/Т полиморфизма rs1801133 гена MTHFR(677) предрасположены к анемии, тромбозам, атеросклерозу, сердечно-сосудистым заболеваниям, первичной глаукоме, не застрахованы от многочисленных патологий плода, включая хромосомные аномалии [25].

Выводы

1) При проведении анализа полиморфных ДНК-маркеров в генах системы гемостаза был обнаружен риск развития тромбозов и тромбоэмболических осложнений у следующих полиморфизмов: полиморфизма rs1801133 гена MTHFR(677), полиморфизма rs6025 гена F5, полиморфизма rs1126643 гена ITGA-2.

2) Прослежена корреляция между мутациями в генах системы гемостаза и тромбофилией, являющейся одним из основных факторов развития репродуктивной дисфункции.

3) Выявленные аллели являются генетическими маркерами и факторами риска развития тромбофилии и тромбозов.

Заключение

Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности обследования женщин, заинтересованных в развитии здорового потомства, на наличие генетических форм тромбофилии для более точной индивидуальной идентификации возможной группы риска во время протекания беременности, а также в целях поддержания уровня фертильности. Выявленные ассоциации являются важнейшим шагом в уточнении молекулярных механизмов наследственной предрасположенности к такому мультифакторному заболеванию, как тромбофилия. Благодаря ассоциации генов предрасположенности к развитию тромбозов и выявлению их хромосомной локализации имеется возможность не только изучения тромбофилических полиморфизмов генов системы гемостаза, но и оказания помощи множеству женщин в вопросах невынашивания беременности, увеличивая уровень их репродуктивного здоровья.

Список литературы

1. Александрова Н.В., Дубова Е.А., Донников А.Е. Полиморфизм генов тромбофилии и морфологические изменения плаценты при беременности, наступившей с помощью вспомогательных репродуктивных технологий // Международный конгресс по репродуктивной медицине, 5-й: Тезисы. Проблемы репродуктивной дисфункции – 2011. – С. 43—44. (спец. выпуск)

2. Баранов B.C., Хавинсон В.Х. Определение генетической предрасположенности к некоторым мультифакториальным заболеваниям. Генетический паспорт / ред.— СПб.: Фолиант, 2001. — 48 с.

3. Баркаган З. С. Геморрагические заболевания и синдромы. – М.: Медицина, 1988 г.

4. Беспалова О.Н. Генетические факторы риска невынашивания беременности. – С-Пб: 2009, Санкт-Петербург.

5. Зайнулина М.С., Корнюшина Е.А., Мозговая М.Л. и др., Тромбофилия в акушерской практике: учебно-методическое пособие Под ред. Э.К. Айламазяна, Н.Н. Петрищева // СПб.: Издательство Н-Л, ООО, 2005

6. Красноружских Е.А., Игитова М.Б. Генетическая предрасположенность к нарушениям гемостаза как фактор риска гестационных и перинатальных осложнений // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 5.;

7. Луговской Э.В. Молекулярные механизмы образования фибрина и фибринолиза – Киев: Наукова думка, 2003.

8. Репина М.А., Сумская Г.Ф., Лапина Е.Н. «Наследственные нарушения системы гемостаза и беременность»

9. Шиффман Ф. Дж. Патофизиология крови. - М: «Издательство БИНОМ» – «Невский Диалект», 2000 г.

10. Cohen V, Panet-Raymond V, Sabbaghian N, Morin I, Batist G, Rozen R. Methylenetetrahydrofolate reductase polymorphism in advanced colorectal cancer: a novel genomic predictor of clinical response to fluoropyrimidine-based chemotherapy. Clin Cancer Res. 2003 May;9(5):1611-5.

11. Doix S., Mahrousseh M., Jolak M. e.a. Factor V Leiden and myocardial infarction: a case, review of the literature with a meta-analysis // Ann Cardiol Angeiol (Paris).- 2003.- V. 52, N 3.- P. 143-149

12. De Bruijn S.F., Stam J., Koopman M.M., Vandenbroucke J.P. Case-control study of risk of cerebral sinus thrombosis in oral contraceptive users and in [correction of who are] carriers of hereditary prothrombotic conditions. The Cerebral Venous Sinus Thrombosis Study Group //BMJ.- 1998.- V. 316, N 7131.- P. 589-592

13. Gershoni-Baruch R, Dagan E, Israeli D, Kasinetz L, Kadouri E, Friedman E. Association of the C677T polymorphism in the MTHFR gene with breast and/or ovarian cancer risk in Jewish women. Eur J Cancer. 2000 Dec;36(18):2313-6.

14. Giovannucci E, Chen J, Smith-Warner SA, Rimm EB, Fuchs CS, Palome C, Willett WC, Hunter DJ. Methylenetetrahydrofolate reductase, alcohol dehydrogenase, diet, and risk of colorectal adenomas. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2003 Oct;12(10):970-9

15. Goldschmidt-Clermont P.J., Coleman L.D. Higher prevalence of GPIIIa PlA2 polymorphism in siblings of patients with premature coronary heart disease // Arch Pathol Lab Med.- 1999.- V. 123, N 12.- P. 1223-1229

16. Guéant-Rodriguez RM, Rendeli C, Namour B, Venuti L, Romano A, Anello G, Bosco P, Debard R, Gérard P, Viola M, Salvaggio E, Guéant JL. Transcobalamin and methionine synthase reductase mutated polymorphisms aggravate the risk of neural tube defects in humans. Neurosci Lett. 2003 Jul 3;344(3):189-92

17. Guttormsen AB, Ueland PM, Nesthus I, Nygård O, Schneede J, Vollset SE, Refsum H. Determinants and vitamin responsiveness of intermediate hyperhomocysteinemia (> or = 40 micromol/liter). The Hordaland Homocysteine Study. J Clin Invest. 1996 Nov 1;98(9):2174-83.

18. http://cyberleninka.ru/article/n/geneticheskie-faktory-riska-trombofilii-u-zhenschin-reproduktivnogo-vozrasta-v-zapadno-sibirskom-regione

19. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/dispomim.cgi

20. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/dispomim.cgi?id=173470

21. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/dispomim.cgi?id=227400

22. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15952129

23. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18754285

24. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18803625

25. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22708328

26. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24779247

27. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22690883

28. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25705304

29. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26721521

30. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26989725

31. http://www.likar.info/pro/article-46434-fiziologiya-sistemyi-gemostaza-chast-1-sosudisto-trombotsitarnyiy-gemostaz-rol-sosudov-v-obespechenii-pervichnogo-gemostaza/ ( физиллогия гемостаза – привычный гемостаз)

32. http://gen-exp.ru/calculator_or.php

33. Kim RJ, Becker RC. Association between factor V Leiden, prothrombin G20210A, and methylenetetrahydrofolate reductase C677T mutations and events of the arterial circulatory system: a meta-analysis of published studies. Am Heart J. 2003 Dec;146(6):948-57. Review.

34. Klerk M, Verhoef P, Clarke R, Blom HJ, Kok FJ, Schouten EG; MTHFR Studies Collaboration Group. MTHFR 677C-->T polymorphism and risk of coronary heart disease: a meta-analysis. JAMA. 2002 Oct 23-30;288(16):2023-31

35. Letter M.H. et al., Lung artery thromboembolism prevention in obstetrics – thrombosis and thrombophilia genetic forms. 2002.1.1.

36. Macchi L., Christiaens L., Brabant S. e.a. Resistance in vitro to low-dose aspirin is associated with platelet PlA1 (GP IIIa) polymorphism but not with C807T(GP Ia/IIa) and C-5T Kozak (GP Ibalpha) polymorphisms // J Am Coll Cardiol.- 2003.- P. 42, N 6.- P. 1115-1119.

37. Martiskainen M., Pohjasvaara T., Mikkelsson J. Fibrinogen gene promoter -455 A allele as a risk factor for lacunar stroke // Stroke.- 2003.- V. 34, N 4.- P. 886-891

38. Moshfegh K., Wuillemin W.A., Redondo M. e.a. Association of two silent polymorphisms of platelet glycoprotein Ia/IIa receptor with risk of myocardial infarction: a case-control study // Lancet.- 1999.- V. 353, N 9150.- P. 351-354.

39. Nishiuma S., Kario K., Yakushijin K. Genetic variation in the promoter region of the beta-fibrinogen gene is associated with ischemic stroke in a Japanese population // Blood Coagul Fibrinolysis.- 1998.- V. 9, N 4.- P. 373-379.

40. Nordengren J., Pilka R., Noskova V. et al. Differential localization and expression of urokinase plasminogen activator (uPA), its receptor (uPAR), and its inhibitor (PAI-1) mRNA and protein in endometrial tissue during the menstrual cycle. Mol Hum Reprod 2004;10:9:655—663

41. Venous thromboembolism, thrombophilia, antithrombotic therapy, and pregnancy. American College of Chest Physicians evidence-based clinical practice guidelines 8th edition. American College of Chest Physicians – Medical Specialty Society. 2001 January.

42. Weiss E.J., Bray P.F., Tayback M. e.a. A polymorphism of a platelet glycoprotein receptor as an inherited risk factor for coronary thrombosis // N Engl J Med.- 1996.- V. 334, N 17.- 1090-1094