Список практических навыков по иммунологии

Список практических навыков по иммунологии

Ориентировочная реакция агглютинации

Ориентировочную реакцию агглютинации ставят на пред­метном стекле.Наносят пастеровской пи­петкой каплю физиологического раствора, затем в ней тщательно размешивают небольшое количество куль­туры до получения гомогенной взвеси бактерий. Рядом с первой каплей наносят каплю сыворотки в разведении 1 : 10, 1 : 20, и смешивают обе капли.Через несколько минут в случае положительного результата наблюдается образование агглютината , которое еще ускорится, если слегка пока­чивать стекло.

2. Реакция развернутой агглютинации с целью серотипирования E. сoli применяется для подтверждения результатов ориентировочной реакции агглютинации с моновалентными сыворотками.

Сначала готовят основное разведение взвеси микроорганизмов (1:50), из которого делают серию разведений путем последовательного переноса 0,5 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда (0,5 + 0,5 физраствора). Из последней пробирки 0,5 мл разведенной взвеси удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку (контроль антигена) вносят 1 мл изотонического раствора хлорида натрия.

В каждую пробирку с разведениями и в контрольную пробирку вносят пастеровской пипеткой по 2 капли моновалентной сыворотки. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37°С на 2 ч, затем сутки выдерживают при комнатной температуре. Учет реакции развернутой агглютинации производят, оценивая последовательно каждую пробирку, начиная с контрольных, при осторожном встряхивании. В контрольных пробирках агглютинации не должно быть. Интенсивность реакции агглютинации отмечают следующими знаками: "++++" — полная агглютинация (хлопья агтлютината в абсолютной прозрачной жидкости), "+++" — неполная агглютинация (хлопья в слабоопалесцирующей жидкости), "++" — частичная агглютинация (хлопья четко различимы, жидкость слегка мутная), "+" — слабая , сомнительная агглютинация (жидкость очень мутная, хлопья в ней плохо различимы), "—" — отсутствие агглютинации (жидкость равномерно мутная).

Титрованне агглютинирующей сыворотки

Тип реакции: реакция агглютинации.

Исследуемый материал: сыворотка животного, гипериммунизированного бактериальной взвесью.

Диагоностический препарат: взвесь убитых бактерий, применявшихся для гипериммунизации.

Принцип метода: к серийным разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют равные количества взвеси убитых бактерий, применявшихся для получения этой сыворотки.

Положительный результат реакции: образование хлопьев, просветление жидкости. Отрицательный результат: равномерная муть. Применение: для определения титра агглютинирующей сыворотки.

Титр агглютинирующей сыворотки -наибольшее разведение сыворотки, в которой еще наблюдается агглютинация. В данном случае титр агглютинирующей сыворотки равен ...

Реакция агглютинации по Видалю с целью серодиагностики брюшного тифа

Для постановки реакции берут:

1) сыворотку исследуемого больного для определения в ней
антител;

2) О - и Н-диагноста кумы бактерий брюшного тифа, паратифа А и паратифа В;

3) физиологический раствор.

Кровь для получения сыворотки берут в количестве—15—20 капель путем укола мякоти пальца или 2 —3 мл при помощи венепункции.

Дают крови свернуться в термостате в течение 30—60 минут, затем простерилизованной петлей обводят сгусток, отделяя его от стенки пробирки, и дают отстояться сыворотке на холоду до образования над сгустком прозрачного слоя. Сыворотку помещают пипеткой в отдельную пробирку. Первое разведение (1:50) делают при помощи пипетки—0,1 мл сыворотки + 4,9 мл физио­логического раствора. Дальнейшие разведения (1:100— 1:200 — 1 : 400—1:800) готовят по обычной схеме.

Берут 6 рядов пробирок по 6 пробирок в каждом. По 1 мл сыворотки разведения 1: 100 наливают в первую пробирку каждого ряда, 1: 200 — во вторую, 1 : 400 — в третью и т. д.; в шестую, контрольную, пробирку наливают 1 мл физиологического раствора.

Во все пробирки первого ряда добавляют по 1—2 капли брюшнотифозного Н-диагностикума; в пробирки второго ряда — брюшнотифозный 0-диагностикум; в пробирки третьего я четвертого ряда добавляют А-паратифозный, Н - и 0-диагностикумы, а в 5-й и 6-й ряд— В-паратифозный H - и 0-диагностикум. Пробирки ставят в термостат на 2 часа, отмечают результат реакции, затем оставляют при комнатной температуре на сутки; после этого срока дают заключение об окончательном результате реакции.

Возбудителем заболевания считается тот микроб, который агглютинируется сывороткой больного. Реакция считается положителыной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1: 100; обычно она наступает в больших разведениях. Если происходит групповая агглютинация с двумя или с тремя антигенами, то за возбудителя болезни принимается тот микроб, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.

Реакция флоккуляции

Тип реакции: частный случай реакции преципитации (нейтрализации).

Исследуемый материал: антитоксическая сыворотка.

Диагностический препарат: токсин или анатоксин в строго определенном количестве.

Принцип метода: к серийным разведениям антитоксической сыворотки добавляют одинаковое количество антигенных единиц токсина или анатоксина.

Положительный результат - образование хлопьев преципитата (флоккулята); отрицательный результат - прозрачная жидкость.

Применение: определение активности антитоксической сыворотки (количества ME - международных единиц в 1 мл сыворотки).

Трактовка результатов: первичная (инициальная) флоккуляция наступает в пробирке, где АГ (антиген) и АТ (антитело), находятся в эквивалентных количествах. Зная количества ингредиентов в пробирке, где произошла инициальная флоккуляция, можно рассчитать активности антитоксической сыворотки. Например, инициальная флоккуляция наступила в пробирке, где находится 0,02 мл сыворотки и 4 АЕ (антигенных единиц) токсина или анатоксина. Составляем пропорцию: 0,02 мл сыворотки эквивалентно 4 АЕ токсина или анатоксина.

Одна АЕ - это такое количество токсина или анатоксина, которое связывается одной ME антитоксической сыворотки, следовательно, 0,02 мл данной сыворотки содержит 4 ME.

Титр антитоксической сыворотки - это количество ME в 1 мл этой сыворотки.

В данном случае, составив пропорцию, можно определить титр:

0,02 мл - 4 ME

1 мл - ХМЕ

Х = (1x4): 0,02 = 200 ME

В данном случае...(результат и расчет).

Титрование комплемента

Тип реакции - реакция иммунного гемолиза.

Исследуемый материал - свежая сыворотка крови.

Дополнительные ингредиенты реакции: гемолитическая система (гемолитическая сыворотка в рабочей дозе и 3% взвесь эритроцитов барана).

Положительная реакция - гемолиз; отрицательная - задержка гемолиза.

Титр комплемента - наибольшее разведение комплемента, в котором наблюдается гемолиз.

Применение: для определения титра комплемента. Если речь идет о титровании комплемента перед постановкой РСК, то титр определяют для дальнейшего расчета рабочей дозы. Используется разведение на 25% концентрированнее, чем титр.

В данном случае...(результат).

Список практических навыков по иммунологии