Главная Случайная страница


Категории:

ДомЗдоровьеЗоологияИнформатикаИскусствоИскусствоКомпьютерыКулинарияМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОбразованиеПедагогикаПитомцыПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРазноеРелигияСоциологияСпортСтатистикаТранспортФизикаФилософияФинансыХимияХоббиЭкологияЭкономикаЭлектроника






Микробиологический анализ эпифитных микроорганизмов зерна и зерновых продуктов

 

На поверхности зерна обитает разнообразная микрофлора. Часть микроорганизмов попадает туда из ризосферы, часть заносится с пылью и насекомыми. Однако на зерне, как и на всей поверхности растений, развиваются лишь некоторые микроорганизмы, так называемые эпифиты.

Эпифитные микроорганизмы, размножающиеся на поверхности стеблей, листьев и семян растений, получили название микроорганизмов филлосферы. Эпифиты питаются продуктами экзосмоса растений, устойчивы к высоким концентрациям фитонцидов, выдерживают периодические колебания влажности.

Для исследования эпифитных микроорганизмов пшеницы сорта «Саратовская-29» и овса сорта «Иртыш-22» использовались методы определения количественного и качественного состава микроорганизмов зерна.

Методика определения количественного состава микроорганизмов зерна одинакова как для пшеницы, так и для овса.

Для определения количественного состава микроорганизмов зерна, навеску (пшеницы, овса), массой 5 г помещают в колбу с 50 мл стерильной водопроводной воды и 2–3 г песка. Колбу взбалтывают круговыми вращательными движениями 10 мин. Из полученной вытяжки готовятся разведения 1:100, 1:1000, 1:10000. (отдельными стерильными пипетками берут по 10 мл суспензии и переносят в колбы, содержащие по 90 мл стерильной водопроводной воды). Затем из каждого разведения делают глубинный посев на МПА в двух повторностях. Чашки инкубируют при 30 °С. Через 3–5 дней инкубации подсчитывают общее число колоний, выросших на МПА в чашках, и рассчитывают количество микроорганизмов на 1 г зерна. Колонии, как правило, подсчитывают с помощью лупы, не открывая чашек Петри. Для удобства отмечают просчитанную колонию точкой на наружной стороне дна чашки, пользуясь стеклографом или чернилами по стеклу.Чтобы определить степень обсемененности изучаемого объекта (микробное число) необходимо результат подсчета количества колоний в чашках Петри, помножить на знаменатель соответствующего разведения и вычислить среднее арифметическое число из полученных цифр. Среднее арифметическое число высчитывается только из цифр одного порядка.Определяя качественный состав микроорганизмов зерна, выросшие на МПА колонии, группируют по культуральным признакам. Из каждой группы колоний готовят препараты, выявляют принадлежность микроорганизмов к роду или семейству и определяют численность микробов каждой группы в процентах от общего количества микроорганизмов. На основании микробиологического анализа делают заключение о качестве зерна. На свежем доброкачественном зерне преобладает Pseudomonas herbicola (до 80 %), образующая блестящие оранжевые колонии. Встречаются Pseudomonas fluorescens, формирующие желтовато-зеленоватые флуоресцирующие колонии; непигментированные неспорообразующие палочки. Дрожжи – блестящие, выпуклые, часто окрашенные в розовые тона колонии.

На несвежем зерне, хранившемся при повышенной влажности Pseudomonas herbicola, Pseudomonas fluorescens не выявляются. Обнаруживаются микрококки, образующие мелкие белые блестящие плоские колонии; спорообразующие палочки; актиномицеты, а также неспороносные палочки. При учете на сусло-агаре выявляются в большом количестве грибы.

Микрофлора муки количественно беднее микрофлоры перерабатываемого зерна, так как при его очистке перед помолом и в процессе помола значительное количество микроорганизмов удаляется вместе с загрязнениями и оболочками зерна.

Степень обсеменения муки микроорганизмами колеблется в широких пределах и определяется степенью обсеменения зерна, характером подготовки его к помолу( способом очистки, применением и режимом кондиционирования – увлажнения с последующим отволаживанием), способом помола, выходом муки и ее сортом.

Для исследования микрофлоры муки «Пахомовская» высшего сорта, был использован метод определения количества плесневых грибов и дрожжей согласно ГОСТ 26972-86.

Метод основан на высеве разведений определенного количества продукта в селективную агаризованную среду, культивировании посевов при (24±1) °С в течение 120 ч, подсчете всех видимых колоний плесневых грибов и дрожжей, типичных по макро- и (или) микроскопической морфологии и пересчете их количества на 1 г продукта.

Для проведения анализа готовят разведения. Взвешенную навеску муки массой (10±0,1) г, предназначенную для приготовления исходного разведения, переносят в колбу, вместимостью 200–250 см3 постепенно добавляют стерильный пептонно-солевой раствор, в соотношении 1:9 (10 г продукта на 90 см3 раствора). Смесь взбалтывают или перемешивают 1 мин и отстаивают 3–5 мин. Исходное разведение отстаивают 10 мин и перед посевом на выявление плесневых грибов и дрожжей снова энергично встряхивают.

По 1 см3 из 10 -2 разведения высевают параллельно в две чашки Петри. В каждую чашку Петри, содержащую исследуемый материал, добавляют не позднее чем через 15 мин 15–20 см3 расплавленную и охлажденную до (45±5) °С агаризованную среду с антибиотиком. Среду немедленно тщательно перемешивают с исследуемым материалом и оставляют для застывания. После застывания среды посевы термостатируют крышками вверх при температуре (24±1) °С в течение 120 ч.

На плотных средах проводят предварительный учет типичных колоний через 72 ч термостатирования посевов и окончательный учет через 120 ч.

На поверхности плотной среды развитие плесневых грибов характеризуется появлением пушистого паутинообразного или ватообразного роста.

Дрожжи на поверхности плотной среды образуют плоские, иногда выпуклые колонии белого или кремового цвета. В глубине агара дрожжи образуют чечевицеобразные колонии. Дрожжевые клетки значительно крупнее бактериальных. Диаметр их достигает 8–10 мкм. Форма дрожжевых клеток разнообразная: яйцевидная, эллиптическая, цилиндрическая, лимоновидная или шаровидная, при почковании на поверхности дрожжевых клеток видны бугорки.

Для подтверждения роста того или иного микроорганизма, каждый из них изучают. Для этого готовят препараты. На середину чистого, обезжиренного предметного стекла наносят каплю стерильной дистиллированной или водопроводной воды, в которую вносят бактериологической петлей небольшое количество исследуемого материала так, чтобы капля жидкости стала слегка мутноватой. Излишек микробного материала на петле сжигают в пламени горелки. Исследуемый материал равномерно распределяют по стеклу, просушивают на воздухе и фиксируют трехкратным проведением через пламя горелки.

На препарат после его фиксации накладывают полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор фуксина Пфейфера или метиленовой сини на

3–5 мин, промывают водопроводной водой, подсушивают и микроскопируют.

Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

На чашках, где выросло от 30 до 300 колоний, подсчитывают все колонии, суммируют и находят среднее арифметическое из них.

Подсчитывать колонии можно с помощью лупы.

Полученное среднее арифметическое число колоний округляют следующим образом:

- если число меньше 100, его округляют до ближайшего числа, кратного 5;

- если число больше 100 и его последняя цифра 5, его округляют до ближайшего числа, кратного 20;

- если число больше 100 и его последняя цифра не 5, его округляют до ближайшего числа, кратного 10.

Количество микроорганизмов в 1 г продукта (Х) вычисляют по формуле

, (1)

 

где – округленное среднее арифметическое число колоний;

q – объем посевного материала, внесенного в чашку, см;

n – степень десятикратного разведения продукта.

Результаты анализа выражают числом от 1,0 до 9,9, умноженным нa 10n, гдe n – cоoтвeтcтвyющaя cтeпeнь 10.

Последнее изменение этой страницы: 2016-06-09

lectmania.ru. Все права принадлежат авторам данных материалов. В случае нарушения авторского права напишите нам сюда...