Главная Случайная страница


Категории:

ДомЗдоровьеЗоологияИнформатикаИскусствоИскусствоКомпьютерыКулинарияМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОбразованиеПедагогикаПитомцыПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРазноеРелигияСоциологияСпортСтатистикаТранспортФизикаФилософияФинансыХимияХоббиЭкологияЭкономикаЭлектроника






Участие в бактериологических и микологических исследованиях.

Микологическое исследование - комплекс методов, применяемых в н.-и. и диагностических лабораториях для выяснения роли грибов в этиологии болезней животных.

 

Микологическое исследование при диагностике микозов включает микроскопию патологического материала для обнаружения возбудителя в органах и тканях больного животного, выделение чистой культуры и её идентификацию. В неясных случаях проверяют патогенность выделенных культур биологической пробой. Дополнительно используют серологический, аллергический, люминесцентный методы диагностики.

 

Отбор патологического материала при дерматомикозах производят с периферии свежих, поражённых очагов (корочки и волосы); при эпизоодическом лимфангите, споротрихозе, актиномикозе стерильно извлекают гной из невскрывшихся абсцессов; при кандидамикозе, аспергиллёзе и др. висцеральных микозах берут соскобы с наложений на слизистых оболочках, а также кусочки поражённых внутренних органов. Патологический материал помещают в стерильные чашки Петри. Для лучшего выявления элементов грибах из пат. материала готовят препараты на предметном стекле в капле 10-20%-ного р-ра едкого натра с добавлением 50%-ного водного р-ра глицерина. Микроскопируют неокрашенные препараты (реже окрашенные по Граму) при малом увеличении, затем при X 400 или X 600. Первичную культуру возбудителей получают посевом пат. материала на агар Сабуро, МПА с глюкозой, кровяной, печёночный, сусло-агар (10-12 пробирок). При значимом загрязнении посторонней микрофлорой можно применить предпосевную обработку пат. материала или добавить антибиотики в питательную среду. Оптимальный рН питательных сред для патогенных грибов составляет 6,0-7,2, температура культивирования 26-30°С, для отдельных представителей 37°С. Посевы выдерживают до 30 сут., т. к. первичные культуры чаще развиваются медленно. Детальное изучение культурально-морфологических признаков, ферментативной активности и определение вида гриба проводят главным образом на специальных средах. Патогенность культур проверяют заражением белых мышей, морских свинок, кроликов, хомяков через скарифицированную кожу, подкожно, интраперитониально, внутривенно, ингаляционным методом. Серологическая реакции (РСК, преципитации, агглютинации), аллергические внутрикожные пробы применяют в комплексе с другими методами при диагностике преим. кандидамикоза, гистоплазмоза, эпизоотич. лимфангита. Люминесцентным методом выявляют у животных микроспорию.

 

Для микологического исследования при диагностике микотоксикозов берут ср. пробы из партий кормов, вызвавших алиментарное отравление животных. Предварительно исключают инфекционные болезни, отравления ядовитыми растениями и ядохимикатами. М. и. состоит из органолептических микроскопических анализов корма, выявления микофлоры и идентификации выделенных культур грибов. Используют биологический и физико-химический методы исследования кормов и культур грибов на токсичность.

 

При органолептическом анализе учитывают влажность, цвет, запах, налёты спороношений грибов (нередко корма, поражённые токсичными грибами, не отличаются по внешнему виду от доброкачественных). Для выявления поверхностной микофлоры зерно высевают в чашки Петри на агар Чапека. Глубинное поражение зерна грибами определяют после предварительной обработки его раствором сулемы 1 : 1000, 3%-ным раствором формальдегида с последующей промывкой стерильной водой (для нейтрализации раствора формальдегида добавляют каплю 5%-ного раствора аммиака). Затем зерно (10-15 шт.) раскладывают на агар Чапека в чашки Петри. При выделении грибов из муки, отрубей, комбикорма пользуются главным образом методом разливки. Взвесь корма (10 г на 100 мл стерильной воды) встряхивают в шуттель-аппарате и по 1 мл взвеси дальнейшего разведения (1 : 1000-10000) распределяют по поверхности агара Чапека на 8-10 чашек Петри. Грубые корма (сено, солома) высевают в чашки Петри на фильтровальную бумагу, увлажнённую стерильным раствором Ван Итерсона. Посевы кормов выдерживают 7-10 суток при t 22, 26°С. На 3-5-е сутки ориентировочно определяют микофлору просмотром колоний грибов на месте роста и микроскопией в капле стерильной воды или физиологического раствора. По частоте обнаружения колоний отдельных видов грибов можно приближённо судить о степени поражённости корма. При посеве методом разливки нагрузку диаспор на 1 г корма учитывают более точно. Из колоний делают отсевы на агар Чапека в пробирки для получения чистых культур грибов и определения их вида. Выделение токсичных вариантов грибов из исследуемых образцов корма - решающий момент в диагностике микотоксикозов. Токсичность образцов корма и культур грибов определяют кожной реакцией на кролике и скармливанием лабораторным животным. Для выявления в кормах и культурах грибов афлатоксинов и зеараленона (Fз) применяют метод тонкослойной хроматографии на силикагеле в сочетании с люминесцентным анализом.

 

Бактериологическое исследование - исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекционных болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, которые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептических условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию (в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, основные клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения, цель исследования). Б. и. включает 3 основных метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патологического или другого исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологических, культурально-биохимических, антигенных и патогенных свойств бактерий.

 

Б. и. начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение). При микроскопии патологического материала готовят мазки-отпечатки из органов, тканей или тонкие мазки из другого исследуемого материала, высушивают их на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследования. Для обнаружения некоторых бактерий (например, возбудителя туберкулёза) патологический материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащения, чтобы повысить в нём концентрацию бактерий и избавиться от посторонних микробов. Для ускоренного обнаружения бактерии применяют люминесцентную микроскопию. Для изучения подвижности бактерий, обусловленной наличием жгутиков, используют микроскопию молодой (12-24 ч) живой культуры с помощью препаратов висячей капли или раздавленной капли. Подвижность бактерий может быть установлена также на основе особенностей роста культуры в полужидком МПА.

 

Выделение культуры бактерий проводят путём посева материала на среды питательные. Чтобы облегчить и ускорить выделение бактерий, используют дифференциально-диагностические и элективные питательные среды (плотные и жидкие), на которых определенные виды бактерий дают характерный для них рост (при этом задерживается рост посторонних микробов). Посев на плотные питательные среды в бактериологических чашках проводят путём растирания шпателем нескольких капель материала по поверхности среды. При исследовании паренхиматозных органов убитых или павших животных обжигают или фламбируют кусочек органа, затем надрезают его стерильными ножницами и с помощью пинцета проводят надрезанной поверхностью по питатательной среде в чашке. В жидкую среду посев материала делают пастеровской пипеткой. Чтобы получить рост изолированных колоний микробов на плотной среде и отделить исследуемые бактерии от сопутствующих микроорганизмов, проводят дробный посев по методу Дригальского. Засеянные чашки и пробирки инкубируют в термостате при оптимальной для роста каждого вида бактерий температуре (чаще 37 °С) в течение 1-2 сут, в некоторых случаях (туберкулёзные бактерии) - до 3-4 недель. Наиболее длительный и сложный этап Б. и. - родовая и видовая идентификация выделенных культур. Изучают только чистые культуры, полученные после пересева из одной колонии и имеющие идентичные морфологические и тинкториальные свойства. Антигенные свойства культуры изучают в реакции агглютинации. Определение патогенных свойств бактерий проводят путём заражения лабораторных животных культурой или фильтратом культуры (при определении токсинообразования).

 

После изучения свойств бактерий сопоставляют полученные данные с признаками бактерий, имеющимися в классификационных схемах или определителях микробов (Д. Берджи, 1974; Н. А. Красилышков, 1949, и др.), и проводят их родовую и видовую дифференциацию. В сомнительных случаях проводят повторное исследование материала. Результаты Б. и. записывают в регистрационный журнал или на бланке лабораторной экспертизы, в заключении которой указывают, какой микроб выделен из исследуемого материала. Диагноз на инфекционную болезнь может быть поставлен только при учёте эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.

 

 

Последнее изменение этой страницы: 2016-07-22

lectmania.ru. Все права принадлежат авторам данных материалов. В случае нарушения авторского права напишите нам сюда...