Проведение бактериологического и микологического анализа исследуемого материала.

Возбудитель сапа.

1. Морфология возбудителя сапа. Сап - заразное заболевание цельнокопытных (лошадь, осёл, мул), протекающее преимущественно в хронической форме и передающееся человеку. В органах (лимфатические узлы, лёгкие, печень и др.) изменения возникают в виде типичных санных узелков различной величины.

Морфология возбудителя. Pseudomonas Mallei - палочка с закругл`нными концами, длиной 1-5 мкм с характерным зернистым строением. Бактерия полиморфна: может иметь коккообразные, вздутые формы; микроб часто располагается нитями, принимает вид палочек с неправильными контурами. Нити из бактерий средней длины, состоят обычно из 4-8 члеников.

Обнаружены фильтрующиеся формы, которые при пассаже на животных восстанавливаются в типичные формы. Палочка сапа грамотрицательна, окрашивается водно-спиртовыми растворами анилиновых красок со щелочными растворами, со щелочными протравами. Наблюдаются биполярные и неравномерно окрашенные палочки. При электронной микроскопии видны светлые участки протоплазмы и плотные гранулы. Спор и капсул палочка не образует. Является факультативным аэробом.

2. Биология, культуральные свойства. Микроб неприхотлив к питательным средам. Его выращивают на мясопептонном агаре и бульоне, картофеле. Рост на средах значительно усиливается при прибавлении к ним до 5 % глицерина. Температурный оптимум 37 °С, ниже 20 °С и выше 45 °С сапная палочка не развивается. Микроб хорошо растет при слабокислой, нейтральной и слабощелочной реакции среды.

Картофельная среда считается дифференцирующей. Рост возбудителя сапа особенно характерен: к 3 дню образуется равномерной слизистый янтарно-коричневый, медообразный налёт, матовый или часто блестящий. К 6-8-му дню янтарная просвечивающая культура приобретает красноватый оттенок, прозрачность налёта теряется. На мясопептонном агаре с 2 % глицерина рост микроба обычно начинается через сутки. Сенная культура на агаре представляет вначале просвечивающий серовато-белого цвета налёт с перламутровым блеском слизистой и вязкой. В мясопептонном бульоне с 2-4 % глицерина сначала возникает равномерная муть, затем выпадает слизистый серо-белый осадок, поднимающийся при лёгком встряхивании пробирки. К 10-му дню на поверхности появляется сероватая слизистая пленка. Сенный микроб свёртывает молоко медленно, чаще на 6-8-й день. Желатину не разжижает, протеолитическое действие выявляется лишь при малых концентрациях желатины. Сапная палочка развивается также на безбелковых синтетических средах, в которых источниками азота и углерода служат аммонийные соли органических и угольной кислот. Индол не образуется. Лактозу и глюкозу расщепляет с выделением кислоты без газообразования.

3. Патогенность и вирулентность. Палочки патогенны для цельнокопытных животных. Лошадей удаётся заражать подкожно и путём скармливания малыми количествами сапной культуры. Лошади часто болеют хронической формой сапа. Крупный рогатый скот, овцы и козы в естественных условиях сапом не болеют.

Весьма резистентны к сапу свиньи, птицы, крысы. Из лабораторных животных сапом заражаются морские свинки, при подкожном заражении они гибнут спустя 10-15 дней, иногда даже через 2-3 мес. В качестве лабораторного животного можно использовать кошку, которая очень чувствительна к заражению. Сап у нее протекает в форме септицемии. Кролики мало восприимчивы, несколько более чувствительны молодые животные. Белая мышь сапом не заражается.

4. Устойчивость во внешней среде. Палочка сапа во внешней среде довольно устойчива: в воде, почве сохраняется до 1,5 месяцев, в выделениях больных, трупах животных, павших от сапа - несколько недель. В замороженных материалах сапный микроб весьма устойчив. Быстро гибнет при нагревании (при температуре 55 С в течение 10 мин, при кипячении - через несколько минут). Высушивание ведёт к гибели микроба через 1-2 недели, губительно действуют на него ультрафиолетовые лучи. Палочка чувствительна к воздействию дезинфицирующих веществ (хлорная известь, формалин, щелочи, марганцево-кислый калий, сулема).

5. Лабораторная диагностика сапа. Материалом для исследования могут служить: стерильно взятые носовые выделения, гнойное отделяемое язв, пунктаты подкожных абсцессов, кусочки органов из трупа, лимфатические узлы.

Консервирование материала возможно 30%-м стерильным глицерином.

Микроскопическое исследование. Микроскопия мазков из патологического материала ввиду отсутствия специфических методов окраски бактерии сапа имеет ограниченное диагностическое значение, но важна для исключения других возбудителей. Мазок окрашивают по Граму и по Романовскому-Гимзе.

Бактериологическое исследование. Посевы материала производят на глицеринизированный картофель, мясопептонный агар и бульон. На картофельно-глицериновой среде через 3-4 дня наблюдается характерный рост возбудителя сапа в виде янтарно-коричневого цвета слизистого налета. К 6-8-му дню культура становится мутной, красноватого оттенка. Чистую культуру получить не всегда удаётся, так как посторонняя флора препятствует росту палочки сапа. При хроническом сапе бактериологическое исследование часто даёт отрицательный результат. Для идентификации возбудителя учитывают его:

· биохимические свойства;

· агглютинабельность;

· патогенность для лабораторных животных.

Биологической пробой заражаются морские свинки (самцы), хомяки, кошки. Исследуемый материал можно вводить подкожно (если он не загрязнен), но более надёжно внутрибрюшное заражение. Через 3-5 дней у заражённого самца развивается орхит. Через 8-15 дней большая часть свинок погибает. На высоте заболеваний свинок забивают и производят бактериологическое исследование органов и тканей.

Серологическое исследование. Основным методом исследования реакция связывания комплемента (РСК), реакцию пассивной гемагглютинации. РСК более чувствительна. Исследование проводят в динамике с учетом нарастания титра антител. При хроническом сапе РСК нередко бывает отрицательной.

Аллергическая проба. Имеет важное значение для подтверждения диагноза сапа. Внутрикожно или накожно на предплечье вводят 0,1 мл маленна (фильтрат 4-недельной бульонной культуры палочки сапа, разведенной в 100 раз). В положительном случае через 24-48 часа на месте введения маленна появляется гиперемия, припухлость, болезненность. При этом может наблюдаться общая реакция в виде недомогания, повышение температуры тела. Проба становится положительной с 10-15-го дня болезни.

Лечение и профилактика сапа. Больных сапом помещают в изолированные палаты строгого режима; для их лечения привлекают квалифицированный персонал, соблюдающий все меры предосторожности и пользующийся индивидуальными средствами специальной защиты (комбинезоны, при их отсутствии - перчатки, халаты, маски, очки, марлевые повязки и т. д.). Основу лечения сапа составляет назначение антимикробных ЛС (бета-лактамных антибиотиков или хинолонов) в сочетании с хирургическим вскрытием и обработкой абсцессов. Лица, подвергшиеся опасности заражения, освобождаются от карантина при отсутствии клинических проявлений в течение 21 суток, но окончательно свободными от возбудителя их считают при отрицательных результатах повторных кожных проб и РСК.

Список используемой литературы.

1. Лабораторные исследования в ветеринарии, под ред. В. Я. Антонова и П. Н. Блинова, М., 1971.

2. Т. С. Костенко и др. «Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии». Москва, «Колос», 2001 г.

3. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: том 2 : учебник / под ред. В. В. Зверева, М. Н. Бойченко, 2010.

4. Саркисов А. X. [и др.], Диагностика грибных болезней (микозов и микотоксикозов) животных, М., 1971.

5. Курасова В. В., Костин В. В., Малиновская Л. С., Методы исследования в ветеринарной микологии, М., 1971.

6. Вашков В. И. Руководство по дезинфекции, дезинсекции, дератизации. Медгиз, М:. 1990 г.

7. Винникова Л. Г. Технология мяса и мясных продуктов – М.: Пищевая промышленность, 1993. – 234 с.

8. Госманов Р. Г. Санитарная микробиология. Лань. Учебники для вузов. Р. Г. Госманов, А. Х. Волков, А. К. Галиуллин, А. И. Ибрагимова-2010.

9. Семёнов Б. С. Частная ветеринарная хирургия / Б. С. Семенов, А. В. Лебедев, А. Н. Елисеев. – М.: Колос, 1999. – 496 с.

10. Студенцов А. П. Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения / А. П. Студенцов, В. С. Шипилов, В. Я. Никитин. – М.: Колос, 2000. – 480 с.

11. Тарарина Л. И. Практикум по ветеринарно-санитарной экспертизе: учебное пособие/ Л. И. Тарарина, А. В. Коломейцев; Краснояр. гос. аграр. ун-т.- Красноярск 2008.-220 с.