Определение количества гемоглобина.

Производится калориметрическими способами. Гематиновый метод Сали основан на образовании р-ра коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с хлористоводородной кислотой. Прибор представлен штативом, в который вставлены 3 пробирки. Две крайние запаяны и содержат р-р гематина; средняя градуирована, нужна для исследования. Прилагается пипетка и стеклянная палочка.

Необходимо:гемометр Сали, пипетка, скарификатор, вата, 0.1% р-р HCI, спирт, эфир, йод, вода. Объект: человек.

Ход работы: В среднюю пробирку гемометра наливают 0,1% р-р HCI до нижней метки. Пипеткой берут 20 мкл крови из пальца, и, обтерев кончик ее ватой, тотчас выдувать кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой кислоты оставался не окрашенным. Не вынимая пипетку, споласкивают ее кислотой. После этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцами по дну пробирки, и ставят в штатив на 5-10 минут. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к содержимому пробирки добавляют по каплям воду до тех пор, пока цвет полученного р-ра не будет совершенно одинаков с цветом стандарта боковых пробирок.

Цифра, стоящая на уровне полученного р-ра, показывает содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Расчет цветного показателя.

ЦП – это соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов. Позволяет определить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. ЦП находят путем деления количества гемоглобина в 1 мкл (в г/л), на число, состоящее из первых 2-х цифр количества эритроцитов с последующим умножением полученного результата на коэффициент 0,3.

ЦП = гемоглобин, г/л * 0,3 /число эритроцитов (первые 2 цифры)

В норме = 0,86 – 1,05

Если ЦП ниже 0,8 – гипохромная анемия, если 0,8-1,1 – нормохромная, гиперхромная – выше 1,1.

Определение осмотической резистентности эритроцитов.

Ход работы: в штативе устанавливают 9 пробирок. Пипетку несколько раз промывают тем реактивом, который предстоит отметить. Сначала вносят в пробирки 1% р-р хлорида натрия, затем воду. См. таблицу. В каждую пробирку вносят по капле цитратной крови. Перемешав кровь, оставляют пробирки на час, затем смотрят результат. Если гемолиза не произошло, эритроциты осядут на дно пробирки, а над ними будет чистый раствор. Если произошел частичный гемолиз, излившийся гемоглобин придает раствору красный оттенок. При полном гемолизе жидкость в пробирке будет однородного красного цвета, а на дне ее не окажется эритроцитов.

Отмечают, в какой пробирке гемолиз только начался (обычно при 0,5% - 5 пробирка), а в какой произошел полностью (0,4% - 6 пробирка).

Виды гемолиза эритроцитов.

Необходимо: штатив с 5 пробирками, пипетки, физиологический р-р, вода, 0,1% хлорида HCI, р-р аммиака, 5 мл крови в пробирке.

Ход работы:

1) В штатив ставят 4 пробирки, в каждую из которых наливают по 3 мл физ. р-ра, воды, р-р НCI и аммиака. В 5ой пробирке кровь.

2) Во все 4 пробирки вносят пипеткой по 2 капли из 5-й пробирки. Оставшуюся в 5й пробирке кровь помещают на 1час морозильную камеру. Затем пробирку вынимают и оттаивают в стакане с горячей водой.

3) рассматривают содержимое всех 5и пробирок, сравнивают.

Подсчет количества лейкоцитов.

Дифференцировка видов лейкоцитов.

В окрашенных мазках периферической крови дифференцировать все лейкоциты. При этом учитывать размеры видимых клеток под микроскопом, насыщенность цитоплазмы, наличие или отсутствие гранул, особенности форм ядра.

Подсчет лейкоцитарной формулы.

Начертить квадрат 10 на 10: Э М С П П Э С С С Э.

Подсчет рекомендуется проводить всегда в одном порядке: половину клеток считать в верхней, половину – в нижней части мазка, не заходя на самый край и середину, по зигзагу (3-4 поля зрения вдоль мазка, 3-4 поля под правым углом к середине мазка, затем 3-4 поля в сторону параллельно краю, вновь под прямым углом вверх и т.д. в одну сторону). Считаем в 100 кл.

Развитие и функции иммунокомпетентных клеток. Взаимодействие клеток в иммунном ответе.

Демонстрация мазков с микробным фагоцитозом нейтрофилов. Подсчет фагоцитарного числа и индекса.

Работа с картой оценки Т- и В-системы иммунитета человека.

Для оценки Т-системы иммунитета пользуются следующими методами:

1.Метод «спонтанных» розеток- определяют количество Т-лимфоцитов в крови

2.Реакция бласттрансформации лимфоцитов in vitro под влиянием ФГА или в микст культуре.

3.Определение динамики бласттрансформации.

4.Оценка продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета

5.Постановка кожных реакций гиперчувствительности замедленного типа на широко распространенные антигены

6.Контактная аллергия к динитрохлорбензолу.

7.Отторжение аллогенного кожного лоскута

8.Биопсия лимфотических узлов и гистологическая оценка тимусозависимых областей вилочковой железы.

Для оценки В- системы иммунитета применяется несколько методов:

1.Определение В-лимфоцитов в крови.

2.Определение в крови уровня иммуноглобулинов.

3.Определение наличия и уровня изогемагглютининов в сыворотке крови, а также естественных антител к широко распространенным бактериям и вирусам.

4.Стимуляция биосинтеза иммуноглобулинов В-лимфоцитами in vitro.

5.Исследование антителогенеза после активной иммунизации несколькими убитыми вакцинам.

6.Исследование катаболизма иммуноглобулинов в организме.

7.Биопсия лимфотических узлов, костного мозга, участков слизистой оболочки кишечника

8.Кожные реакции, выявляющие гиперчувствительность немедленного типа.

Определение групп крови.

Для проведения определения группы крови требуются:

1) Стандартные сыворотки I, II, III и IV групп крови

2) Кровь, групповую принадлежность которой мы будем определять

3) Предметное стекло для размещения капель сывороток

4) Стеклянные лопаточки для переливания

5) Раствор NaCl 0.9% (физиологический р-р).

На предметное стекло помещают отдельно (не смешивая) по капле стандартной сыворотки I, II, III групп. Добавляют к каждой капле 2-3 капли крови, групповую принадлежность которой мы хотим определить.

! Нельзя допустить попадания одной сыворотки к другой, иначе р-р будет недостоверен, поэтому перемешивание крови и сыворотки надо производить чистыми стеклянными лопаточками (новой для каждой капли).

Через 2-4 минуты добавляем к каждой капле 1-3 капли р-ра NaCl 0,9% для лучшей оценки.

Агглютинация наступила, если заметны невооруженным глазом эритроциты, склеившиеся между собой в виде комочков.

Принцип определения группы крови.

Примечание: + - видна агглютинация (склеившиеся эр.); “-“ – нет агглютинации.

Определение резус-фактора.

Проведение определения резус-фактора крови экспресс-методом:

Для проведения требуются:

1) Стандартная антирезус сыворотка

2) Контрольная сыворотка (не имеет резус-антител)

3) Кровь, наличие или отсутствие резус фактора, в которой мы хотим определить

4) Физиологический р-р

5) Предметное стекло

6) Стеклянные палочки для размешивания

На предметном стекле делаем пометку К (контроль) и Rh(резус-фактор). Рядом с К капаем 4-6 капель контрольной сыворотки, а рядом с Rh 4-6 капель стандартной антирезус сыворотки так, чтобы они не смешивались.

Рядом с каждой капель сывороток капаем 2-3 капли крови. Смешиваем контр сыворотку с кровью (обязательно первой, чтобы контроль был чист!), затем – стандартную сыворотку с кровью. К каждой капле добавляем 1-2 капли физиологического р-ра – для лучшего определения. Покачивая предметное стекло, определяем наличие или отсутствие агглютинации.